摘要
目的： 通过观察加味柴胡疏肝汤对癫痫大鼠的一般状态、体重、平均每次发作持续时间、癫痫发作等级及海马组织miR-34a、Bcl-2、NL RP-1、Caspase-3表达的影响，探究加味柴胡疏肝汤的治疗癫痫作用机制。 方法： 选择SD大鼠分为模型组和假手术组，予模型组大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品的办法构建癫痫模型，将模型诱导成功后的大鼠细分为：模型组、加味柴胡疏肝汤低剂量组、加味柴胡疏肝汤高剂量组及卡马西平组。予观察7d，随后卡马西平组大鼠予卡马西平灌胃治疗，加味柴胡疏肝汤高、低剂量组分别予加味柴胡疏肝汤的高剂量、低剂量灌胃治疗，假手术组及模型组分别予等容积生理盐水进行灌胃处理，各组大鼠每日早晚各灌胃治疗1次，持续灌胃干预8周。通过视频监控回看并记录各组大鼠一般情况、癫痫发作持续时间、癫痫发作级别，采集大鼠脑电图图像，灌胃治疗结束2周后，予各组大鼠断头取其海马组织，进行RT-PCR检测各组大鼠海马组织炎症因子NLRP-1、Caspase-3及抗凋亡因子Bcl-2和外泌体miR-34a表达水平；进行Western Blot检测各组大鼠海马组织中NLRP-1、Bcl-2、Caspase-3相对表达水平；TUNEL法检测观察大鼠海马组织神经元细胞凋亡并计算凋亡率情况。 结果： (1)各组大鼠行为学及一般状态的变化：假手术组大鼠毛发滑顺致密且有光泽，皮肤紧实有弹性，肌肉结实，行动敏捷，反应灵活及饮食饮水均如常，体重增加；模型组大部分大鼠出现激惹，乱窜，毛发枯槁黯淡，皮肤松弛，反应显著迟缓，卷缩成团，饮食饮水量下降，体重减轻；加味柴胡疏肝汤低剂量组大鼠小部分激惹，毛发疏松且无光泽，皮肤稍松弛，肌肉松弛，反应迟缓，饮食饮水量增多；加味柴胡疏肝汤高剂量组大鼠无激惹，毛发光泽且顺滑，体重显著增加；卡马西平组大鼠无激惹，绝大部分毛发光泽且滑顺致密，肌肉紧凑，反应灵敏，且饮水饮食稍差。 (2)体重变化：治疗前，模型组、加味柴胡疏肝汤低、高剂量组及卡马西平组的体重无差异(P＞0.05)，但三组的体重均低于假手术组(P＜0.05)。治疗后，与模型组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组及卡马西平组的体重均增加(P＜0.05)；卡马西平组与加味柴胡疏肝汤高剂量组的体重比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 (3)平均每次癫痫发作持续时间变化：治疗前，模型组、加味柴胡疏肝汤低、高剂量组及卡马西平组的平均每次癫痫发作持续时间无差异(P＞0.05)。治疗后，与模型组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组及卡马西平组的平均每次癫痫发作持续时间均缩短(P＜0.05)，卡马西平组与加味柴胡疏肝汤高剂量组的平均每次癫痫发作持续时间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 (4)癫痫发作级别的变化：假手术组大鼠无癫痫发作：0级。治疗前，模型组、加味柴胡疏肝汤低、高剂量组及卡马西平组的（Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ）发作等级相比较无差异(X2=0.300，P=0.960)。治疗后，与模型组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组及卡马西平组的癫痫发作级别均减轻(P＜0.05)，卡马西平组与加味柴胡疏肝汤高剂量组的（Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ）发作等级比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 (5)RT-PCR检测：与假手术组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组、卡马西平组、模型组的NLRP-1、Caspase-3及miR-34a均增加(P＜0.05)，但四组的Bcl-2低于假手术组(P＜0.05)；与模型组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组、卡马西平组NLRP-1、Caspase-3及miR-34a均减少(P＜0.05)，但三组的Bcl-2高于模型组(P＜0.05)；卡马西平组与加味柴胡疏肝汤高剂量组的NLRP-1、Caspase-3、miR-34a及Bcl-2比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 (6)Western Blot检测结果：与假手术组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组、卡马西平组、模型组的NLRP-1、Caspase-3均增加(P＜0.05)，但四组的Bcl-2低于假手术组(P＜0.05)；与模型组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组、卡马西平组NLRP-1、Caspase-3均减少(P＜0.05)，但三组的Bcl-2高于模型组(P＜0.05)；卡马西平组与加味柴胡疏肝汤高剂量组的NLRP-1、Caspase-3及Bcl-2比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 (7)TUNEL检测结果：与假手术组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组、卡马西平组、模型组的神经细胞凋亡数量均增加(P＜0.05)；与模型组比较，加味柴胡疏肝汤低、高剂量组、卡马西平组神经细胞凋亡数量均减少(P＜0.05)，卡马西平组与加味柴胡疏肝汤高剂量组的神经细胞凋亡数量比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论： 一、加味柴胡疏肝汤可以改善癫痫大鼠的一般状态，增加大鼠的体重；缩短了癫痫的发作持续时间，降低了癫痫的发作级别。 二、加味柴胡疏肝汤可促进癫痫大鼠抗凋亡因子Bcl-2表达，抑制炎症因子NLRP-1、Caspase-3表达，抑制miR-34a表达，抑制神经细胞的凋亡。
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