摘要
目的： 通过研究CDH23基因敲降对肾透明细胞癌细胞形态及生物学行为的影响，探讨CDH23能否促进肾透明细胞癌细胞发生肉瘤样形态转化以及对细胞增殖和侵袭的影响；通过研究CDH23敲降对细胞粘附、F-肌动蛋白和细胞骨架的影响，并检测CDH23与MAGI-1的相互作用以及EMT相关蛋白的表达，初步探讨其作为EMT候选钙粘蛋白参与上皮间质转化和肾透明细胞癌肉瘤样形态转化的分子机制。 方法： 选取人肾透明细胞癌细胞系7860为实验对象，感染CDH23重组慢病毒载体，应用RT-qPCR和Westernblot对CDH23干扰表达效率进行检测，选取CDH23表达下降显著的两条序列进行后续实验研究，应用HE染色和鬼笔环肽染色检测CDH23敲降对肾透明细胞癌细胞形态的影响；应用CCK-8、平板克隆和流式细胞术检测CDH23敲降对肾透明细胞癌细胞增殖的影响；应用划痕愈合实验和Transwell迁移侵袭实验检测CDH23敲降对肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响；通过细胞粘附、鬼笔环肽染色和细胞免疫荧光双染色实验探索CDH23基因敲降对肾透明细胞癌细胞中CDH23与MAGI-1相互作用的影响，同时通过Westernblot检测E-cadherin和Vimentin的表达，研究CDH23作为EMT候选钙粘蛋白参与EMT过程的可能机制及其促进肾透明细胞癌肉瘤样形态转化的可能潜在分子机制。 结果： 荧光显微镜下观察各组慢病毒感染7860细胞，荧光丰度均达到80%，通过嘌呤霉素进一步筛选获得稳定克隆细胞株，RT-qPCR和Westernblot结果表明：与NC组比较，各实验组CDH23在mRNA和蛋白水平的表达均显著降低（P＜0.05），提示成功构建CDH23稳定干扰表达的肾透明细胞癌细胞系，其中CDH23-shRNA（1#）（P＜0.05）和CDH23-shRNA（3#）（P＜0.01）CDH23表达下降显著；HE染色和鬼笔环肽染色实验发现CDH23敲降组细胞呈梭形、嗜酸性和成纤维细胞样，细胞形态伸长，异型性明显，提示CDH23敲降促进了肾透明细胞癌细胞的肉瘤样形态转化；CCK-8、平板克隆和流式细胞术实验结果表明，CDH23基因敲降组细胞的增殖能力较NC组细胞无显著性差异（ns）；划痕愈合实验和Transwell迁移实验结果表明CDH23敲降组肾透明细胞癌细胞的迁移能力明显增加（P＜0.001），Transwell侵袭实验结果表明CDH23敲降肾透明细胞癌细胞的侵袭能力显著增加（P＜0.001）；细胞粘附实验表明，CDH23敲降肾透明细胞癌细胞的粘附能力显著降低（P＜0.01）；鬼笔环肽染色实验结果表明，CDH23敲降肾透明细胞癌细胞具有异常拉长的细胞形状，F-肌动蛋白丝聚集，片状及丝状伪足增加；细胞免疫荧光双染色实验结果表明CDH23敲降的肾透明细胞癌细胞CDH23与MAGI-1共定位率显著降低（P＜0.01）；CDH23敲降肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程相关蛋白发生显著变化，其中E-cadherin表达显著下降，Vimentin表达显著上升（P＜0.01）。 结论： CDH23表达下调能够促进肾透明细胞癌细胞肉瘤样形态转化，细胞迁移和侵袭能力增加，细胞粘附性显著降低，F-肌动蛋白丝聚集，片状及丝状伪足增加，CDH23与MAGI-1相互作用减少，并影响EMT相关蛋白表达。CDH23作为一个新的EMT候选钙粘蛋白参与肾透明细胞癌细胞EMT过程，促进肾透明细胞癌细胞发生肉瘤样形态转化，增加肿瘤细胞迁移及侵袭能力。CDH23有可能成为透明细胞肾细胞癌伴肉瘤样分化临床靶向治疗的新指标。
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