摘要
DISC1蛋白是一种多功能的支架蛋白，通过不同的结构域与细胞内的其它分子相互作用，充当将某些蛋白质聚集在一起的支架。大量研究表明DISC1基因与精神分裂症、自闭症谱系障碍等精神疾病有着一定的相关性，并且DISC1基因与某些精神疾病特定的内表型存在遗传关联。随着研究的深入，研究人员发现DISC1不仅与多种精神疾病相关，而且在早期大脑发育以及突触的形成和维持中也发挥着重要的功能。在早期大脑发育中，DISC1蛋白通过参与微管-中心体机制调控神经元迁移，并且参与调控神经元增殖以及增殖到迁移的转换过程。DISC1蛋白还通过调节神经嵴的结构和功能参与突触的形成与维持。因此，DISC1蛋白有望作为某些精神疾病的易感性标志物以及治疗靶点，通过对DISC1蛋白的深入研究也有助于理解疾病的机制以及大脑发育过程。因此本研究通过制备抗DISC1单克隆抗体为DISC1蛋白的相关研究提供工具。本研究利用生物信息学分析软件对DISC1蛋白的二级结构、疏水性、可及性以及抗原指数进行预测，根据预测结果选择了DISC1基因的截短片段构建了表达重组蛋白的质粒。通过分子克隆手段构建表达载体，在原核表达系统诱导并纯化了DISC1（720-854aa）、DISC1（417-447aa）、DISC1（680-718aa）三组重组蛋白。通过蛋白纯化方法获得了大量且纯度较高的蛋白。利用纯化的重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠，多次免疫后通过ELISA方法判断小鼠免疫后血清效价达到104以上，免疫效果良好。通过细胞融合、筛选以及多轮亚克隆最终得到5株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过小鼠腹水诱导生成大量单克隆抗体，并通过硫酸铵沉淀法对单克隆抗体进行了粗纯。通过Westernblot以及免疫荧光实验检测了不同细胞系中DISC1蛋白的表达，验证了获得的抗体部分具有良好的抗原结合能力以及特异性。还通过Western blot检测了6-8周龄BALB/c小鼠脑组织中DISC1蛋白的表达。本研究制备的单克隆抗体可以作为研究DISC1蛋白的生物学特性的工具，为未来进一步研究DISC1蛋白与大脑发育以及疾病发生提供了自主的原料，为相关研究提供了一些基础。
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