摘要
目的： 通过观察凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况，探讨小柴胡汤联合顺铂对Hep-G2细胞凋亡的影响，为临床使用小柴胡汤联合顺铂化疗提供实验室依据。 材料与方法： 提供血清的动物为SPF大鼠15只，根据《伤寒论》中小柴胡汤的配伍，煎取药液，予其中5只每只7.18g/Kg?d生药量灌胃5天，其余10只等量等频生理盐水灌胃，末次灌胃后1h腹主动脉取血，制备含药血清。将对数生长期的Hep-G2细胞随机分为三组，分别为空白血清组、空白血清+顺铂组、小柴胡汤血清+顺铂组，空白血清组加入空白血清，空白血清+顺铂组加入空白血清与终浓度为2.4mg/L的顺铂，小柴胡汤血清+顺铂组加入小柴胡汤含药血清及终浓度为2.4mg/L的顺铂。48h后收集样本，流式细胞仪PI染色法测定细胞凋亡率，相同样本重复三次试验；Westernblot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达，相同样本重复三次。采用SPSS21.0软件进行统计分析，三组细胞凋亡率运用Kruskal-WallisH检验并比较中位数，Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达运用ImageJ进行灰度分析，用多组间单因素方差分析进行统计检验，比较平均值，α=0.05。 结果： 1.小柴胡汤含药血清顺铂组中位凋亡率为11.8%，空白血清顺铂组中位凋亡率为1.2%，空白血清组中位凋亡率为0.6%（p＜0.05）。 2.小柴胡汤含药血清加顺铂处理的Hep-G2细胞Bcl-2蛋白表达低于空白血清加顺铂组，空白血清组表达量最高（p＜0.05）。 3.小柴胡汤含药血清加顺铂处理的Hep-G2细胞Bax蛋白表达高于空白血清加顺铂组，空白血清组表达量最低（p＜0.05）。 4.小柴胡汤含药血清加顺铂处理的Hep-G2细胞Caspase-3蛋白表达高于空白血清加顺铂组，空白血清组表达量最低（p＜0.05）。 5空白血清组、空白血清加顺铂组、小柴胡汤含药血清加顺铂组Bcl-2/Bax依次降低。 结论： 1.顺铂可以促进Hep-G2肝癌细胞的凋亡，顺铂诱导下的Hep-G2细胞凋亡途径与Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白参与的线粒体凋亡途径有关。 2.小柴胡汤可以增强顺铂对Hep-G2肝癌细胞促凋亡效果，其机制与和顺铂协同进一步减少抑凋亡蛋白Bcl-2表达，增加促凋亡蛋白Bax、Caspase-3蛋白的表达有关。 3.本研究结论可作为临床使用小柴胡汤联合顺铂化疗，以达到增加化疗效果，减少顺铂剂量，减少化疗毒性及副作用的实验室依据。
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