摘要
目的： 本实验建立大鼠坐骨神经夹持损伤模型，对坐骨神经损伤大鼠进行电针“环跳穴”治疗。根据不同的治疗时间，观察每组大鼠功能恢复情况、神经纤维形态变化情况、髓鞘变化情况和MIF表达的变化等，来衡量坐骨神经损伤修复的程度，比较治疗组与模型组的差异，更进一步的分析电针“环跳穴”在坐骨神经损伤修复中的作用及对相关因子MIF的影响。 方法： 实验选用81只健康SD大鼠，SPF级，6个月左右，均为雌性，体重为250±20g，根据实验设计方案依照随机数字表随机分配，将81只大鼠平均分为假手术组，模型组，环跳组3个大组，每大组有27只。每一大组中按3个时间点各分为3个小组，为3d组、7d组和14d组，每个小组各有9只。 造模方法参考钳夹法夹持坐骨神经制作Ⅲ度损伤模型。即大鼠麻醉后固定于实验台上，俯卧位，暴露出大鼠右下肢，先在其臀股交界处进行剃毛，消毒。按坐骨神经走行方向，进行切口，寻找到坐骨神经，手持止血钳夹持坐骨神经，扣于止血钳第3扣位置，压力约5kg，持续10s后，打开止血钳齿扣，松开10s后，依前法再次扣上止血钳10s，10s以后再停歇10s，重复三次，看神经损伤的宽度约有2mm，进行消毒，然后逐层缝合。 造模结束后，所有大鼠常规喂养，其中假手术组和模型组不进行针刺治疗，但为排除人为干扰因素，每日按治疗组固定方法作固定处理。造模成功后，环跳治疗组在大鼠完全苏醒之后，开始针刺“环跳”穴，当大鼠患侧下肢肌肉组织快速抽搐，并有足趾颤抖的现象时留针，此时，用电针仪连接毫针针柄，其中一极连于环跳穴上，另一极连于鼠尾，制成无关电极。用疏密波，频率为2Hz，电流1mA，15min/次，1次/d，按规定时间点，分别连续治疗3d、7d和14d。治疗到相应的时间点时，测量大鼠坐骨神经功能指数，计算大鼠运动功能数值并比较其恢复情况；然后对大鼠进行神经电生理测试，测定其神经传导速度，以更准确的估计各组大鼠神经功能恢复的程度。测量结束后，采用过量麻醉法处死大鼠，提取坐骨神经损伤段，固定备用，用于日后检测。 通过对SFI测量，对坐骨神经功能恢复情况计算。通过MNCV测量，探讨坐骨神经恢复程度。通过HE染色法，可观察到坐骨神经损伤处的病理形态。通过透射电镜观察大鼠髓鞘厚度的变化。通过免疫组化、免疫荧光检测观察坐骨神经损伤处MIF阳性表达的变化情况。 结果： 1坐骨神经功能指数（SFI） 测量SFI，造模后，治疗前，先测量一次，假手术组SFI指数明显高于另外两组（P＜0.05），提示此次造模成功。治疗后，每个时间段小组的治疗组均优于模型组（P＜0.05）。通过横向损伤时间比较，14d组优于7d组，7d组优于3d组，可见，治疗组恢复速度优于模型组，治疗到14d恢复效果最好。提示治疗时间越长，损伤神经的恢复效果越好。 2神经电生理(MNCV) 运动神经传导速度检测（MNCV）表明，造模后，造模组与假手术组相比较，造模组的MNCV降低（P＜0.05），提示造模成功。治疗后，每个时间段小组的治疗组均比模型组高（P＜0.05）。通过横向损伤时间比较，14d组优于7d组，7d组优于3d组。提示治疗时间越长，损伤神经的恢复效果越好。 3HE染色 假手术组可见大鼠神经纤维正常走行，条理清晰，轴突明显，神经髓鞘紧紧包裹轴突且连续性好，雪旺细胞分布均匀。模型组，神经纤维杂乱，不见轴突与髓鞘，神经纤维周围被大量炎性细胞浸润。治疗组，3d时神经纤维不规整，出现水肿，可见轴突断裂，髓鞘脱落，炎性细胞增多；7d时神经纤维水肿更加明显，轴突与髓鞘消失；14d时可见神经纤维形态结构有所恢复，纤维分布较之前规则。 4免疫组织化学检验 测量MIF的平均光密度值，可见假手术组，3d、7d、14d平均光密度值均维持较低水平，无明显差异。治疗组比模型组在3d、7d时平均光密度值高，但14d数值迅速下降，接近于假手术组。而模型组14d数值升高明显。 5透射电子显微镜观察（ETM） 假手术组坐骨神经纤维的髓鞘规整，密度均匀，具有一定厚度，轴突饱满。造模组可见髓鞘向轴突凸起，侵占轴突，髓鞘板层分裂，极易崩解，有的模糊或消失，轴突形成空洞。经过几天对比可见，模型组髓鞘重组进展较慢。治疗组改变较模型组明显。第14天时即可见髓鞘几乎重组完成，厚度增加，排列有序，质地均匀，神经纤维较为饱满。治疗组第7d病理变化改善程度优于3d组，14d组优于7d组。 6免疫荧光检测 假手术组3d、7d、14d均有少量表达，神经纤维呈条索状，走行正常。模型组、治疗组阳性物表达较假手术组明显增多。模型组比假手术组，阳性表达明显上升，神经纤维杂乱，至14d阳性物表达依旧不减。治疗组3d、7d可见阳性表达明显增多，但到14d阳性表达明显减少，与假手术组接近。 结论： 1电针环跳穴，可使坐骨神经损伤大鼠运动功能及坐骨神经传导速度的恢复加快。 2电针环跳穴，可使MIF病理分泌周期缩短。 3电针环跳穴，可使神经纤维、髓鞘修复速度加快。 4电针环跳穴，7d组优于3d组，14d组明显优于7d组，提示电针环跳穴可加速坐骨神经的修复时间。
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