摘要
南极磷虾是地球上目前资源量最大的单种生物之一，其代表性海洋生物产品南极磷虾油近几年成为一个重要开发方向。磷虾油中重要的生物活性成分虾青素具有很强的生理活性和抗氧化能力，但由于磷虾油水溶性差、生物利用度低，为相关产品加工带来一定困难。纳米脂质体可以很好地解决上述问题，既构建了一个安全稳定的体系，同时比普通脂质体粒径更小更易吸收利用，在食品、药品领域应用广泛，在此基础上壳聚糖与纳米脂质体的结合进一步增强其稳定性。 本文旨在研究壳聚糖-磷虾油纳米脂质体，探究不同工艺参数对脂质体性质的影响并结合响应面设计进行工艺优化，并探究优化后产品的理化特性以及在斑马鱼动物模型中对丙烯酰胺引起的氧化应激和生长发育的保护作用，使其能更好地应用到药品、食品、化妆品领域中，主要研究内容和结论如下: （1）壳聚糖-磷虾油纳米脂质体的制备工艺优化 利用薄膜分散-超声法制备脂质体。以卵磷脂：胆固醇、卵磷脂：磷虾油、磷酸盐缓冲液用量、壳聚糖浓度分别做单因素试验，得到初步的适宜配比为卵磷脂∶胆固醇=4∶1，卵磷脂∶磷虾油=20∶1，磷酸盐缓冲液用量30mL，壳聚糖浓度为0.1%。 采用响应面分析法（Response surface methodology，RSM）对卵磷脂胆固醇比、卵磷脂磷虾油比、壳聚糖浓度进行三因素三水平优化，以粒径和包封率为响应值，通过对模型方程求解获得最优条件为∶卵磷脂:胆固醇=5∶1，卵磷脂∶磷虾油=19.6∶1，壳聚糖浓度为0.146%。在该最优条件下，粒径为145nm，包封率为98.1%。 （2）壳聚糖-磷虾油纳米脂质体的表征及体外抗氧化活性试验 不同壳聚糖浓度（0.05%、0.15%、0.25%）下磷虾油纳米脂质体的粒径分别为131d.nm、136d.nm和159d.nm，且与对应透射电镜中观察到的形貌一致，电镜中也显示脂质体状态很稳定，与预期相符。同时对不同壳聚糖浓度脂质体的热稳定性、流变性、傅里叶红外光谱进行分析进一步验证了其稳定结构。 不同浓度纳米脂质体的体外抗氧化实验结果表明其具有清除自由基作用，磷虾油样品浓度为0.36mg/mL时清除率均最高，DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率分别为87.3%、83.1%、75.3%，其中羟自由基的清除能力中三个浓度组（0.28mg/mL、0.31mg/mL、0.36mg/mL）均超过0.3mg/mL Vc组。样品也具备一定还原能力，但其抗氧化活性主要还是通过清除自由基发挥作用的。 （3）壳聚糖-磷虾油纳米脂质体对丙烯酰胺诱导的氧化应激斑马鱼胚胎抗氧化能力及生长发育的影响 通过活性氧（Reactive oxygen species，ROS）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）水平的结果说明壳聚糖-磷虾油纳米脂质体能有效降低丙烯酰胺（Acrylamide，AA）诱导的氧化应激水平，其中效果最好的组ROS水平降到丙烯酰胺组（AA组）的60.5%，MDA水平降到AA组的63.6%。通过超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）三种抗氧化酶的酶活性测定结果说明脂质体预处理可有效改善AA影响下降低的酶活性，其中高浓度组（稀释300倍，样品浓度4.8×10-3mg/mL）SOD、CAT和GSH-Px活力均显著升高，分别提高到AA组的177.4%、312%和374.7%。由此可知，脂质体能够有效地改善斑马鱼胚胎内的抗氧化酶水平，从而对机体起到抗氧化作用。 从自主运动、心率、孵化率、畸形率、第五天体长等生长发育有关指标的结果可得，AA单独处理对斑马鱼胚胎的生长发育有明显的抑制作用，但孵化前期对孵化率有促进作用，而脂质体处理能明显改善AA带来的影响。
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