摘要
研究背景与目的： 近年来,肺癌的发病率及死亡率一直处于上升趋势,是世界上最常见的癌症之一,位于癌症死亡的首位。虽然肺癌治疗方法众多，化疗就是其中主要治疗方法之一，但由于化疗耐药等现象导致治疗效果差，复发转移快、死亡率高。因此迫切需要开发新型抗癌候选药物。近年来，从中草药中提取的具有生物活性的化合物逐渐成为研究的焦点。和厚朴酚(honokiol，HNK)就是其中一味，HNK具有广泛的治疗作用，包括抗肿瘤。但抗肿瘤具体机制不明，当前研究结果多数集中在HNK通过促进肿瘤细胞凋亡达到抑肿瘤增殖及转移的作用，其他研究机制很少，因此本实验探索HNK对A549细胞细胞周期的作用机制及与自噬的关系，以期发现HNK治疗肺癌新的分子机制。 材料与方法： 用不同浓度HNK（0.10.20.40.80.160ummol/L）作用与A549细胞，在显微镜下观察细胞形态及数量的变化并拍照。运用CCK-8实验方法检测不同时间节点（6、12、24、48小时）HNK对A549细胞的抑制率。运用流式检测细胞周期分布，WB检测细胞周期相关蛋白的表达情况。设立对照组，溶媒组（DMSO），HNK组（浓度80ummol/L），3-MA组，3-MA+HNK组，运用流式检测细胞周期分布，免疫荧光染色检测自噬及WB检测细胞周期及自噬相关蛋白的表达。 结果: 1.通过显微镜观察，HNK能抑制A549细胞的生长，剂量越大，抑制越强。HNK抑制A549细胞增殖。通过CCK-8实验结果表示，HNK能抑制A549细胞增殖，并且这种抑制具有剂量和时间依赖性。 2.运用流式细胞计数检测细胞周期分布，发现随着HNK浓度增加，G0/G1期的细胞比例明显增高，而S期和G2/M期的细胞比例明显减少。WB检测CyclinD1的表达水平明显降低，P16的表达水平明显增加，且呈剂量相关性。综上结果表明，HNK可诱导A549细胞周期被阻滞于G0/G1期。 3.通过不同分组，运用流式细胞计数结果显示与对照组比较HNK能使A549细胞阻滞在G0/G1期比例增加，CyclinD1的表达水平下降，P16的表达水平增加，而自噬蛋白LC3Ⅱ表达量增加，自噬负性蛋白P62表达量减少，说明HNK能使A549细胞发生自噬，从而使A549细胞周期阻滞。3-MA+HNK组与HNK组比较，A549细胞阻滞在G0/G1期比例减少，CyclinD1及P62的表达水平增加，P16及LC3Ⅱ表达量减少，说明3-MA能拮抗HNK诱导A549细胞发生的自噬。 结论： 本实验表明，HNK能诱导A549细胞发生自噬，使A549细胞在G0/G1期发生细胞周期阻滞，从而抑制A549细胞的增殖。HNK可以作为一味潜在的抗肺癌药物。
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