摘要
第一部分 胰腺癌代谢亚型和临床特征、CT特征的相关性研究 目的：本课题组前期基于液相色谱质谱（Liquidchroma-massspectrography,LC-MS）代谢组学方法，发现82例胰腺导管腺癌（Pancreaticductaladenocarcinoma,PDAC）患者依据其血清代谢特征可以分为两种代谢亚型，本研究将两种亚型命名为SubtypeA型和SubtypeB型，通过对SubtypeA和SubtypeB型临床特征和CT特征的差异性分析，探索代谢亚型与临床和CT特征的相关性。 方法：本课题组前期采用LC-MS代谢组学技术对82例胰腺癌血清样本进行非靶向代谢组学分析得到原始数据，并使用主成分分析（Principalcomponentanalysis,PCA）发现82例患者依据血清代谢特征可分为两种亚型，本研究将其命名为SubtypeA型（n=51）、SubtypeB型（n=31），对两种代谢亚型患者的临床和CT特征进行单因素分析，包括性别、年龄、糖尿病、高血压、近期体重下降、黄疸、血清糖类抗原19-9（Carbohydrateantigen19-9,CA19-9）、癌胚抗原（Carcino-embryonicantigen,CEA）、胆固醇、甘油三酯、肿瘤分化、肿瘤大小、部位、形状、囊实性、主胰管扩张、胆总管扩张、远端胰腺萎缩、强化程度、淋巴侵犯、血管侵犯、远处转移，找出代谢亚型与临床、CT特征的相关性。综合两亚型临床及CT特征，使用多因素逻辑回归探索区分两亚型的独立影响因素。统计软件使用SPSS26.0，两组间计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。 结果：（1）单因素分析结果显示：SubtypeA型糖尿病比例明显低于SubtypeB型（P＜0.05），SubtypeA型远处转移比例明显高于SubtypeB型（P＜0.05）。其余性别、年龄、高血压、近期体重下降、黄疸、CA19-9、CEA、胆固醇、甘油三酯、肿瘤分化程度、肿瘤大小、部位、形状、囊实性、主胰管扩张、胆总管扩张、远端胰腺萎缩、强化程度、淋巴侵犯、血管侵犯均无统计学差异（P＞0.05）。 （2）综合临床和CT特征的多因素逻辑回归结果显示：远处转移是区分SubtypeA、SubtypeB两种亚型的独立影响因素（P＜0.05，OR=4.879），SubtypeA型相较于SubtypeB型更有远处转移的倾向。 结论：（1）SubtypeA型远处转移的倾向相较于SubtypeB型更高，提示SubtypeAamp;nbsp;型与更恶劣的肿瘤生物学行为相关。 （2）胰腺癌不同代谢亚型与不同的远处转移情况相关，提示对于两代谢亚型微观代谢差异的深入研究有助于在代谢层面上诊断胰腺癌的远处转移。 第二部分 两亚型代谢特征的确定及差异代谢物和远处转移的相关性研究 目的：基于LC-MS代谢组学技术，筛查胰腺癌SubtypeA型和SubtypeB型的差异代谢物及差异代谢通路，分析两代谢亚型在血清代谢层面的异质性，探索微观代谢特征与宏观远处转移的相关性。 方法：选择经本课题组前期LC-MS代谢组学技术分析，依据其血清代谢特征可分为SubtypeA（n=51）和SubtypeB（n=31）两种亚型的82例胰腺癌患者，联合单变量和多变量统计方法对两亚型间差异代谢物进行初步筛选。单变量分析包括t检验和变异倍数分析（Foldchangeanalysis,FCAnalysis），多变量统计分析包括偏最小二乘法判别分析（Partialleastsquaresdiscriminationanalysis,PLS-DA）和正交偏最小二乘法判别分析（Orthogonalpartialleastsquaresdiscriminationanalysis,OPLS-DA），初步筛选投影变量重要性值（Variableimportantinprojection,VIP）＞1且P＜0.05的差异代谢物。使用二元逻辑回归纳入临床混杂因素，剔除受临床混杂因素影响的差异代谢物。根据VIP值排序两亚型各自富集的代谢物，并联合KEGG通路富集分析两亚型之间的差异代谢通路，确定两亚型的代谢特征，并以此为两亚型命名。结合第一部分SubtypeA型相较于SubtypeB型更有远处转移的倾向，将两亚型的差异代谢物与远处转移做Spearman相关性分析，再以胰腺癌有转移组（n=21）和无转移组（n=61）为因变量，以临床混杂因素为自变量，并纳入每种差异代谢物为自变量，分别做二元逻辑回归分析，找出小分子代谢物与宏观胰腺癌远处转移的相关性。 结果：（1）本研究经单变量及多变量分析后，以VIP＞1且P＜0.05为标准初步筛选出两种亚型的血清差异代谢物共51种，使用二元逻辑回归排除受临床混杂因素干扰的代谢物共6种，余45种。 （2）联合两亚型经KEGG通路分析得出的差异代谢通路以及两亚型各自差异代谢物的富集情况，将SubtypeA型命名为胆汁酸盐升高型，表现为胆汁酸盐的明显富集；SubtypeB型命名为混合型，表现为甘油磷脂、羧酸、脂肪酰类、氨基酸衍生物的混合富集。结合本研究第一部分可知胆汁酸盐升高型更倾向于远处转移。 （3）45种差异代谢物与远处转移的相关性分析结果发现，与远处转移具有明显相关性的代谢物共有12种，其中有3种是胆汁酸盐，且胆汁酸盐的相关性值（r值）相对较大，包括：牛磺鹅去氧胆酸盐（P＜0.001，r=0.443）、甘草脱氧胆酸盐（P＜0.001，r=0.417）、牛磺胆酸盐（P＜0.001，r=0.385）。3种胆汁酸盐与胰腺癌远处转移的二元逻辑回归结果发现牛磺鹅去氧胆酸盐（P=0.003；OR=3.20）、甘草脱氧胆酸盐（P=0.007；OR=3.67）、牛磺胆酸盐（P=0.005；OR=2.17）是胰腺癌远处转移的危险因素，对胰腺癌远处转移有正向的影响作用。 结论：（1）胆汁酸盐升高型和混合型患者的代谢特征具有较大的差异性，联合第一部分SubtypeA型更倾向于远处转移，提示患者血清胆汁酸盐水平可能与远处转移情况具有相关性。 （2）牛磺鹅去氧胆酸盐、甘草脱氧胆酸盐、牛磺胆酸盐与远处转移呈明显正相关，提示通过术前检测患者这三种血清胆汁酸盐水平的升高，有利于帮助临床诊断患者的远处转移情况，也对临床针对不同代谢特征患者预后的评估以及选择靶向治疗药物建立了基础。 （3）本研究发现两亚型间胆汁酸盐的代谢差异仅为两亚型间最主要的代谢差异。除胆汁酸盐外，两亚型仍存在许多其他类型的差异代谢物，部分与远处转移相关，部分不相关，提示两亚型间仍有其他的代谢特征差异，但在本研究中尚未发现这些差异代谢物的相互规律，并且导致分型的影响因素可能不止是远处转移，在未来需要进一步挖掘。
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