摘要
目的： 研究糖尿病对椎间盘退变的影响，以及探讨六味地黄丸防治糖尿病椎间盘退变的作用机理，为六味地黄丸治疗糖尿病腰痛提供依据。 方法： 收集我院因腰腿痛就诊住院的患者病例，分为对照组和糖尿病组，基于CT重建图像分别测量腰椎各椎间隙高度，基于腰椎MRI进行腰椎间盘退变评分。 选择六味地黄丸作为DM模型组干预药物，通过建立DM大鼠模型，将60只SD大鼠分成中药组（n=20）、观察组（n=20）和对照组（n=20）。观察组和中药组以STZ柠檬酸钠溶液按30mg/kg腹腔注射，对照组以相等剂量柠檬酸钠溶液作为安慰剂腹腔注射。DM大鼠造模成功后，中药组灌胃六味地黄胶囊混悬液（26mg/kg），对照组和实验组灌胃等量的生理盐水，每天灌胃一次，持续至取材前。于灌胃8周和16周各取材一半，L5/6椎间盘多聚甲醛固定。采用苏木素-伊红（HE）染色各组大鼠L5/6椎间盘组织，置于光学显微镜下观察各组L5/6椎间盘形态组织变化及并对其进行评分。采用免疫组织化学法检测各组大鼠L5/6椎间盘组织中沉默信号调节蛋白6(Silencingsignalregulatorprotein6，SIRT6)、Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen，Col-1)、Ⅱ型胶原(TypeⅡcollagen，Col-2)、蛋白聚糖、基质金属蛋白酶-3（Matrixmetalloproteinase-3，MMP3）、基质金属蛋白酶-13（Matrixmetalloproteinase-13，MMP13）蛋白表达变化。采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠L5/6椎间盘组织中SIRT6、Col-1、Col-2、蛋白聚糖、MMP3、MMP13mRNA表达变化。探讨六味地黄丸对DM大鼠L5/6椎间盘病理学的影响及SIRT6、Col-1、Col-2、蛋白聚糖、MMP3、MMP13表达的变化。 结果： 与对照组比较，糖尿病患者L2/3、L3/4、L4/5、L5/S1椎间隙高度显著降低；L2/3、L3/4、L4/5、L5/S1椎间盘退变评分显著增加。 通过HE染色观察六味地黄丸对DM模型大鼠椎间盘病理学影响，研究结果显示，DM模型大鼠在经灌胃六味地黄丸8周和16周后，对照组大鼠L5/6椎间盘组织无明显变化，观察组大鼠L5/6椎间盘组织显示明显退变特征，说明DM可以造成椎间盘退变，模型建立成功。中药组大鼠在经六味地黄丸干预后L5/6椎间盘组织退变病理学较观察组大鼠有明显改善。灌胃8周和16周后，与对照组相比，观察组大鼠L5/6椎间盘形态组织学评分均增加；与观察组相比，中药组大鼠在经六味地黄丸干预后L5/6椎间盘形态组织学评分有显著下降趋势（P＞0.05）。通过免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法检测各组大鼠L5/6椎间盘组织中影响椎间盘正常生长分化的因子，其研究结果显示，灌胃8周和16周后，与对照组相比，观察组大鼠L5/6椎间盘组织SIRT6、蛋白聚糖mRNA和蛋白表达水平明显下降，MMP13mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）；与观察组相比，中药组大鼠L5/6椎间盘组织SIRT6、蛋白聚糖mRNA和蛋白表达水平明显升高，MMP13mRNA和蛋白表达明显下降（P＜0.05）。 结论： 通过临床研究可发现，糖尿病患者较年龄相近的非糖尿病患者椎间盘退变更显著。本文实验结果说明，DM模型大鼠经六味地黄丸干预后，通过上调SIRT6、Col-1、Col-2、蛋白聚糖蛋白表达，下调MMP3、MMP13表达，使大鼠椎间盘的形态学及评分明显改善，提示六味地黄丸可以有效缓解DM大鼠椎间盘退变，有望作为临床治疗DM患者椎间盘退变药物，为椎间盘的临床治疗提供理论依据。
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