摘要
目的: 探讨独活寄生汤(DHJST)对类风湿关节炎模型小鼠淋巴系统及免疫反应的影响;探讨洋川芎内酯Ⅰ(SenkyunolideⅠ,SEⅠ)对类风湿关节炎模型小鼠淋巴回流功能及炎症反应的影响;探讨洋川芎内酯Ⅰ对淋巴管内皮细胞的炎症反应情况和对Notch与NF.KB信号通路的影响，以及对淋巴管平滑肌细胞功能基因的影响。 方法: 1.独活寄生汤对n妤.Tg小鼠淋巴系统及免疫反应的研究 采用随机数字表法将10只3月龄TNF-α转基因(TNF-Tg)小鼠随机分为模型组(TNF-Tg)和DHJST组，5只/组;5只野生型同窝小鼠作为正常对照(Control)组。DHJST组采用独活寄生汤灌胃:TNF-Tg组和Control组采用相同体积的生理盐水灌胃，1次/天，12周后取材。采用阿尔新蓝一苏木精(ABOG)染色观察骨量及滑膜炎症情况;免疫荧光染色，观察促炎M1型巨噬细胞、淋巴管新生以及分布情况。 2.洋川芎内酯Ⅰ对TNF-Tg小鼠淋巴回流功能及炎症反应的研究 采用随机数字表法将18只2月龄左右TNF-Tg小鼠随机分为TNF—Tg组和SEI组，6只/组:6只野生型同窝小鼠作为Control组。SEI组采用洋川芎内酯Ⅰ溶剂灌胃，TNF-Tg组和Control组采用相同体积的生理盐水灌胃，1次/天，10周后取材。采用苏木精一伊红(眦)染色观察肝肾毒性及滑膜炎症情况;ABOG染色观察骨量及软骨情况;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色标记破骨细胞;免疫荧光染色观察，淋巴管新生以及分布情况;吲哚菁绿一近红外(ICG-NR)检测淋巴管回流功能:胭窝淋巴结三维成像系统检测淋巴结情况;热痛仪检测小鼠足底痛阈值。 3.洋川芎内酯Ⅰ对淋巴管内皮及平滑肌细胞的机制研究 研究洋川芎内酯Ⅰ对TNF-a诱导的炎症环境下淋巴管内皮细胞(1ymphaticendothelialcell，LECs)炎症表型的影响;淋巴管内皮细胞与淋巴管平滑肌细胞(1ymphaticvesselsmoothmusclecell，LSMCs)共培养，检测炎症环境下，研究洋川芎内酯Ⅰ对淋巴管平滑肌细胞功能基因的影响;用Q-PCR检测Notch信号通路的影响;Westernblot检测NF-KB信号通路的影响:细胞免疫荧光染色观察P65入核情况。 结果: 1.独活寄生汤促进TNF-Tg小鼠淋巴管新生，减轻关节炎症 独活寄生汤治疗12周后，踝关节组织形态学染色结果显示，软骨侵蚀、骨侵蚀以及滑膜炎症情况明显改善，促炎M1型巨噬细胞数量减少，毛细淋巴管生成增加，集合淋巴管分布广。 2.洋川芎内酯Ⅰ促进TNF-Tg小鼠淋巴回流，减轻关节炎症 洋川芎内酯Ⅰ治疗10周后，进行ICG-NIR检测结果显示，洋川芎内酯Ⅰ可提高淋巴管搏动频率和清除率;胭窝淋巴结三维成像结果显示，洋川芎内酯Ⅰ可以减轻淋巴结的肿胀程度;热痛仪检测结果显示，洋川芎内酯Ⅰ可提高小鼠足底部热痛阈值;踝关节组织形态学染色结果显示，洋川芎内酯Ⅰ能减轻滑膜炎症、减少破骨细胞数量、改善软骨与骨侵蚀情况和促进淋巴管新生，对肝肾无明显毒副作用。 3.洋川芎内酯Ⅰ减轻淋巴管内皮细胞炎症水平，提高淋巴管平滑肌细胞功能基因表达 洋川芎内酯Ⅰ对TNF-α诱导的淋巴管内皮细胞炎症因子水平、Notch和NF-KB信号通路有抑制作用;洋川芎内酯Ⅰ促进TNF-α诱导后淋巴管平滑肌细胞功能基因表达水平的恢复。 结论: 独活寄生汤及有效成分洋川芎内酯Ⅰ可以促进淋巴管的回流功能治疗TNF-Tg小鼠的关节炎症，洋川芎内酯Ⅰ通过抑制TNF-u诱导的淋巴管内皮细胞炎症，抑制Notch和NF-KB信号通路，改善淋巴管平滑肌细胞功能基因的表达，促进淋巴回流功能。
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