摘要
第一部分:去甲基化药物治疗伴DNMT3A及TET2基因突变老年急性髓系白血病疗效与安全性的研究 目的:探究去甲基化药物治疗伴DNMT3A及TET2基因突变老年急性髓系白血病疗效与安全性的研究。方法:回顾性分析2019年7月至2021年10月在张家港市第一人民医院血液内科收治的接受去甲基化药物治疗的年龄大于60岁初治AML(非APL)患者的临床资料，共47例。其中19例为含地西他滨(decitabine，DAC)的方案化疗，28例为含阿扎胞苷(azacitidine，AZA)的方案化疗，探究去甲基化药物治疗老年AML患者时的疗效、不良反应，对两组的总反应率(ORR)、总生存期(OS)进行比较，以及影响疗效的预后因素。结果:47例患者中，含DAC组的19例患者中，ORR为57.9％，NR为42.1％，含AZA组的28例患者中，ORR为60.7％;NR为39.3％;AZA组的ORR率虽然高于DAC组，但两组的ORR和NR率未见统计学差异(P＞0.05)。DAC组中位OS是9个月，1年OS率31.58％;AZA组中位OS是10个月，1年OS率40.74％。与DAC组相比较，AZA组在中位OS上有一定的改善趋势，但差异无统计学意义。单因素分析表明存在TET2、NARS、FLT3-ITD、NPM1、DNMT3A+TET2突变的患者与无该基因突变者在OS上存在统计学差异(P＜0.05)，伴有DNMT3A+TET2+双基因突变和伴DNMT3A突变的患者在OS上存在显著差异。有3个以上基因突变的患者与有0.3个基因突变的患者OS差异也存在统计学差异(P＜0.05)。结论:1.去甲基化药物联合HAG方案治疗老年AML患者有一定的疗效，但DAC组和AZA组之间未见明显差异，可能与样本量少有关，仍需大样本多中心数据研究进一步探究。2.老年AML患者常有多种基因突变，在本研究中突变基因10％以上的有DNMT3A、TET2、NARS、FLT3-ITD、TP53、NPM1、RUNX1、KMT2D、ASXL1、BCOR。上述基因突变仅PTPN11对治疗效果有影响。3.基因突变通常对AML患者预后有一定影响，单因素分析表明存在TET2、NARS、FLT3-ITD、NPM1、DNMT3A+TET2双突变的患者对OS有一定影响，以及有3个以上基因突变的患者也与OS有关;而存在DNMT3A、RUNXl突变的患者对OS未见明显影响。伴有DNMT3A+TET2+双基因突变和伴DNMT3A突变的患者在OS上存在显著差异。 第二部分:地西他滨对白血病细胞株(Kasumi-1、U937)的抑制作用 目的:就DAC用于AMLkasumi-1、U937细胞株，体外观察其对白血病细胞的增殖抑制作用，及其抗肿瘤机制进行初步研究。方法:用不同浓度的地西他滨处理kasumi-1和U937细胞，采用CCK8法检测地西他滨对kasumi-1细胞、U937细胞24h、48h、72h的增殖抑制情况，用Graphpadprism计算增殖抑制率。采用流式细胞仪检测DAC诱导细胞凋亡情况。蛋白印迹(westernblot)检测DAC作用于kasumi-1细胞时DNMT3A、TET2蛋白表达水平。所有实验均重复三次。结果:随着DAC药物浓度的不断增加，细胞的增殖抑制率逐渐增加;随着一定时间内的延长，细胞增殖抑制率也随之增加，说明DAC对kasumi-1细胞和U937细胞的增殖抑制率有一定的浓度和时间依赖性。72h时，DAC作用于kasumi-1和U-937细胞的IC50值分别是13.46uM、8.32uM，相比较而言，U937细胞对DAC药物的敏感性高于kasumi-1细胞。Westernblot结果显示，在Kasumi-1细胞中，DAC作用于细胞后，DNMT3A蛋白的表达水平有所下降，TET2蛋白的表达水平有所提高。结论:DAC可以抑制kasumi-1和U-937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并呈时间和剂量相关性。DAC可以上调TET2表达，下调DNMT3A蛋白表达。
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