摘要
炼蜜是一种很有价值的中药辅料，既能够增强丸剂药物的粘性，还能和其他药物协同作用，增强药理活性。但炼蜜的条件和方法不同，所得炼蜜的成分和活性存在差异。目前关于不同温度炮制炼蜜物质和功能变化的研究还比较少。 本研究采用不同温度和时间对蜂蜜进行炮制形成炼蜜，测定炼蜜中类黄酮和美拉德反应产物5-羟甲基糠醛（5-HMF）等成分的变化，并对炼蜜的抗氧化活性进行了检测，分析了不同温度炮制炼蜜对结肠癌HT-29细胞增殖的影响，主要结果如下： 1、蜂蜜经不同温度炼制后，用XAD-2大孔树脂吸附洗脱浓缩，用比色法、高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS），分析了不同温度炮制炼蜜的总黄酮、12种类黄酮和5-HMF含量的变化规律，结果表明，不同温度炮制炼蜜总黄酮含量随炮制温度的升高而有所增加，新鲜蜂蜜的总黄酮含量为8.07±0.23mg Rutin/kg，180℃、60min处理后炼蜜总黄酮含量则达到了315.91±10.64mg Rutin/kg。不同温度炮制炼蜜黄酮类化合物组分有所变化，木犀草素的含量在炼蜜前后变化不显著。槲皮素含量却随处理温度和时间的增加有所增加，在180℃、60min处理后显著性增加达到最高值0.5360±0.1516mg/100g蜂蜜；儿茶素和柚皮素含量在所有处理温度下都显著性下降；白杨素、芹菜素、异鼠李素、高良姜素的含量经过80℃和150℃的热处理后显著性降低，但上述物质在120℃和180℃部分处理后，没有显著性变化；5-HMF含量随着处理的温度增加而增加。 炮制前后炼蜜醇溶组分的DPPH自由基清除活性、FRAP总抗氧化能力都有所变化。新鲜蜂蜜自由基清除活性IC50为0.34±0.25g、而经180℃、10min炼制后达到最低值0.03±0.00g，说明蜂蜜经过不同温度炮制后DPPH抗氧化活性增加。炼蜜的FRAP总抗氧化能力随处理温度和时间的增加而增加，新鲜蜂蜜FRAP值为0.33±0.44mol/kg，180℃、60min处理后炼蜜的FRAP值为17.28±0.94mol/kg，FRAP总抗氧化能力显著地增加了52倍。为了分析不同温度炮制炼蜜的抗氧化活性的增加和5-HMF含量的相关性，我们测试了不同浓度的5-HMF标准品的抗氧化能力。结果表明5-HMF的抗氧化能力并不随5-HMF浓度增加而增加，当5-HMF标准品浓度从0.01mg/mL上升至5mg/mL时，浓度上升了500倍，而FRAP总抗氧化能力仅增加了1.2倍。180℃、60min热理炼蜜比新鲜蜂蜜的总抗氧化能力提高了52倍，说明炮制炼蜜中抗氧化活性的显著增加并不主要是因为5-HMF的含量增加。 2、MTT结果表明不同温度炮制的炼蜜醇提取物都能够显著抑制HT-29细胞的增殖，180℃、60min炮制炼蜜醇提取物浓度为200mg/mL时具有最大的体外抑制效果，抑制值为0.73±0.07。相较于添加培养基的对照组而言，用DAPI染色细胞后，发现炼蜜醇溶组分处理后细胞荧光变亮，细胞的数量明显减少，说明添加炼蜜样品能够诱导体外增殖的HT-29细胞的凋亡。检测醇溶组分样品处理后caspase3酶活性发现，所有实验组较添加培养基的对照而言，caspase3酶活性不具有显著性差异，说明炼蜜导致肿瘤细胞数量减少可能是由非caspase3酶依赖性的凋亡途径引起的。 综上所述，炮制炼蜜后总黄酮含量、5-HMF含量显著性增加，并且抗氧化活性显著性增加。说明炼蜜中可能形成了新的具有强抗氧化活性的物质。炼蜜醇溶组分比蜂蜜醇溶组分具有更高的结肠癌细胞增殖抑制效果，炼蜜增加了对HT-29细胞凋亡的诱导作用，可能是非caspase3酶相关的凋亡途径。
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