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NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18在原代脑微血管内皮细胞中的激活及作用

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目的：以脂多糖(LPS)及三磷酸腺苷(ATP)刺激原代脑微血管内皮细胞(Brain microvascular endothelial cells,BMECs)，探讨NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18在原代BMECs中的激活及作用，进一步探讨其与脑小血管病(CSVD)的相关性，为基于免疫炎症寻找新型CSVD的诊疗标记物，从而开发新型治疗CSVD的药物,提供实验依据和理论基础。 方法：获取较高纯度的原代BMECs，细胞形态学观察原代BMECs的生长情况；细胞免疫荧光染色检测原代BMECs标志物VIII因子相关抗原(vWF)及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。实验分正常对照组、LPS刺激组、LPS和ATP共同刺激组；ELISA检测各实验组BMECs的NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18的表达情况；MTT法检测各实验组BMECs存活率。 结果：（1）细胞形态学观察脑微血管段在分离培养48h后，呈典型的“串珠状”或“分枝状”；培养第4d时脑微血管段周围爬出内皮细胞，呈典型的“短梭形”；培养第8d时细胞汇合度达80%以上，表现典型“铺路石”或“漩涡状”；细胞免疫荧光染色法结果显示vWF表达阳性，GFAP表达阴性，BMECs纯度(vWF的阳性细胞表达率)达95%以上；（2）ELISA结果显示，与正常对照组相比较，LPS单独刺激组BMECs的IL-1β和IL-18表达无显著影响(P＞0.05)；而LPS和ATP共同刺激组BMECs的IL-1β和IL-18表达明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；（3）MTT结果显示，与正常对照组相比较，LPS单独刺激组BMECs存活率降低，但差异无统计学意义(P＞0.05)；而LPS和ATP共同刺激组BMECs存活率明显降低，几乎无存活的细胞，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论：（1）LPS和ATP两种促炎剂可以刺激原代BMECs中NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18的产生明显增加；（2）LPS和ATP两种促炎剂可以明显降低原代BMECs的存活率；（3）NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-1β和IL-18可能与CSVD的发病机制有关。

王丽

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脑小血管病 发病机制 原代脑微血管内皮细胞 炎症小体 白细胞介素-1β 白细胞介素-18

硕士

临床医学

刘国荣、潘晓华

2019

内蒙古科技大学包头医学院

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