摘要
自2016年以来，国内各地陆续出现由星状病毒引起的雏鹅痛风的报道，因没有有效的防控措施，导致雏鹅大量死亡，发病率和死亡率居高不下，使养鹅业损失惨重。自2018年起，本实验室陆续收到来自黑龙江各地送检的雏鹅样本，为此针对鹅星状病毒开展一系列研究，具体研究内容和结果如下。 对雏鹅送检样本肝或肾提取组织总RNA，反转录为cDNA，设计特异性鹅星状病毒RT-PCR引物，用分子生物学方法鉴定病毒；用11日龄鹅胚分离星状病毒阳性样本的病毒，盲传至鹅胚稳定死亡，PCR鉴定鹅星状病毒是否在鹅胚内繁殖并收集阳性鹅胚的病毒；设计15对引物对毒株全基因组序列进行测序，并做同源性和进化树分析；把对鹅胚致死性最强的一株病毒命名为Astv/Goose/Heilongjiang/ZYL02/2019，用鹅胚测定其半数致死量；通过口服和皮下注射的方式感染健康雏鹅，测定其对雏鹅的致病性，判断是否出现与送检病料相同的病理变化；应用原核表达系统表达该毒株的ORF2衣壳蛋白，作为包被抗原包被酶标板，建立鹅血清星状病毒抗体的间接ELISA检测方法，用于监测免疫雏鹅的抗体效价；选用SDA15A VG佐剂和10%铝胶佐剂，分别制备该毒株的免疫原液，雏鹅分别免疫0.25ml和0.5ml，免疫7天后20ELD50攻毒，判定不同免疫佐剂及免疫剂量对雏鹅的保护效果。 鉴定为阳性的样本用鹅胚分离出三株鹅源肾致病型星状病毒，三株病毒基因组全长分别为7181nt、7182nt、7190nt，基因全序列已上传NCBI（登录号：OM811458、OM811459、OM811460）。遗传进化分析显示三株病毒与已知的2型鹅星状病毒在同一分支，同源性均高于95%，且尚未发生同源重组。选定病毒株的鹅胚半数致死量为10-1.7，发病的雏鹅表现出典型的鹅星状病毒引起的临床症状和病理学变化，发病率高达95%，耐过的雏鹅发育也明显受到影响。该毒株对雏鹅组织有广泛嗜性，以肝、肾组织的病毒载量较高，分别为4.57×1010copies/g和3.16×1010copies/g。病理剖检可见关节、皮下、内脏组织器官尿酸盐沉积。组织学检查可见肝细胞空泡样变性，肾小管上皮细胞变性、坏死，肠黏膜上皮细胞脱落，脑组织弥漫性胶质细胞浸润。根据72份阴性血清的读数值计算出间接ELISA方法的Cut-off值为0.298，建立的间接ELISA检测方法的特异性、灵敏性及重复性都很好。3日龄雏鹅皮下接种0.5ml SDA15A VG佐剂处理的灭活毒株，雏鹅免疫4天后血清间接ELISA OD450nm即为0.404，呈阳性，免疫7天后攻毒0.2ml20ELD50，保护率可达75%。 综上所述，本研究成功分离鉴定了三株肾致病型鹅星状病毒，并证明该病毒是引起黑龙江省部分地区雏鹅痛风病的主要病原；建立了检测该病毒及其抗体的分子生物学和免疫学方法，并证明获得的毒株有较好的免疫原性。为鹅星状病毒卵黄抗体的研究及致病机理的研究提供了参考。
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