摘要
全世界范围内，在众多恶性肿瘤中肺癌具有最高的发病率和死亡率，其中非小细胞肺癌占比约85%，是肺癌的常见类型。非小细胞肺癌具有很强的个体差异性和异质性，恶性程度较高，预后差，通过传统常规的诊断手段难以满足临床的需求，而且具有侵入性、耗时费力、价格昂贵、患者依从性差等不足，因此需要一种使用简便快捷、微创或无创、取样方便和准确性高的方法提升临床诊断性能。血浆中含有人体内大量的、比较全面的蛋白质种类，能够可靠的综合反映身体状况。此外，血浆样本相对于传统诊断方法获取生物样本非常方便，而且可定时多次取样，在时间和空间上动态全面预测病情变化，因此血浆比较适合于挖掘生物标志物。另外，血浆中含有大量的高丰度蛋白，低丰度蛋白只有不到1%，然而往往一些具有疾病诊断意义的生物标志物就是低丰度蛋白，所以从血浆低丰度蛋白中挖掘具有肺癌诊断价值的标志物具有重大的意义和应用价值。 目的：旨在通过筛选非小细胞肺癌血浆低丰度差异表达蛋白，挖掘具有潜在诊断价值的非小细胞肺癌生物标志物，并进行标志物潜在价值的评估，为临床提供更加准确高效的非小细胞肺癌诊断方法。 方法：收集非小细胞肺癌患者和健康人的血浆样本，去除血浆中高丰度蛋白后进行比较蛋白质学分析，筛选出所有差异表达蛋白（P＜0.05，Fold change value＞1.2）。然后对所有差异表达蛋白进行蛋白注释、蛋白质功能富集和蛋白相互作用网络构建等生信分析，再筛选出具有潜在诊断价值的蛋白。另外通过阅读文献选出几个有诊断价值的蛋白，通过ELISA实验对所有具有诊断潜力的蛋白进行验证，免疫组化实验检测组织表达水平。 结果：蛋白质组学共鉴定出1237个蛋白质，其中1058个蛋白可定量，最终筛选出173个差异表达蛋白，上调蛋白73个，下调蛋白100个。对差异表达蛋白的KEGG通路富集结果发现，差异表达蛋白显著富集在补体系统及凝血级联信号通路，包括CFH和C9两个蛋白。随后对所有具有诊断潜力的蛋白（CFH、C9和C4d、C5a、SAA2、AAT和IDH1）进行的ELISA验证结果显示与健康组相比肺癌组C9，C4d，SAA2和AAT的表达水平明显上调，具有统计学意义（P＜0.05），良性对照组的C9，C4d，C5a，SAA2和AAT明显上调，具有统计学意义（P＜0.05）；与良性对照组相比，肺癌组C4d和SAA2表达水平明显上调，具有统计学意义（P＜0.05）。其中SAA2能够完全将肺癌患者鉴别出来，而且免疫组化结果显示SAA2在组织中也明显上调，与ELISA结果一致。 结论：从我们的非小细胞肺癌血浆蛋白谱筛选到标志物C9蛋白，经实验验证C9，C4d，SAA2和AAT的表达水平显著上调，表明这四个蛋白具有作为非小细胞肺癌诊断标志物的潜力，有希望应用于临床为非小细胞肺癌诊断提供新的手段。
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