摘要
目的： 临床上血瘀型慢传输型便秘患者多见，导师于永铎教授在传统中医辩证基础上，提出慢传输型便秘“久病血瘀，瘀毒损络”病机假说，应用“活血化瘀，解毒通络”治法治之，并以此组方形成活血化瘀，解毒通络的中药复方化瘀通便汤在临床上应用。本研究观察化瘀通便汤治疗慢传输型便秘的临床疗效；探讨慢传输型便秘大鼠模型制备的方法；探讨化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)表达的影响；探讨化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠P物质(SP)和血管活性肽(VIP)表达的影响；探讨化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白3(AQP3)的影响，从临床研究及实验研究两部分，多种机制联合探讨化瘀通便汤治疗血瘀型慢传输型便秘的假说。 材料与方法： 论文一化瘀通便汤治疗慢传输型便秘的临床研究 选取辽宁中医药大学附属第三医院（辽宁省肛肠医院）符合筛选条件的慢传输型便秘患者63例，随机数字表法随机分为治疗组32例，对照组31例。治疗组采用化瘀通便汤口服，对照组采用麻仁润肠丸口服，治疗14天。观察患者治疗前后排便频率、粪便性状、使用泻剂、腹胀和每次排便时间，记录治疗组和对照组治疗前后主要症状积分，计算总积分；观察治疗组和对照组患者的临床疗效。 论文二化瘀通便汤治疗慢传输型便秘的实验研究 第一部分慢传输型便秘大鼠模型的制备 72只大鼠按随机数字表法，依照体质量随机分为6组，模型组60只（5组），空白对照组12只（1组）。模型组60只大鼠给予大黄粉灌胃，大黄粉初始计量为3mg／(10g·d)，每天灌胃一次。每天剂量在前一天的基础上增加3mg／(10g·d)，至50%以上大鼠出现粥样便，维持此剂量直到80%大鼠粥样便消失。如此循环三轮后，诱导实验性慢传输型便秘大鼠模型。 观察模型组每轮模型制备时间、大黄粉使用剂量；观察模型组和空白对照组大鼠造模前后体质量，粪便质地，毛发，活动度；观察两组大鼠首次排黑便时间；测量两组大鼠24小时粪重。 第二部分化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞的影响 STC造模成功后，模型组60只大鼠随机分为模型对照组、化瘀通便汤组(低、中、高剂量组)、西药对照组，每组各12只。根据动物与人体每公斤体重剂量折算系数表计算大鼠灌胃的中药剂量，灌服各组大鼠，每日1次，连续14天。高剂量组予96g/kg/d(生药含量，下同)，中剂量组给予48g/kg/d，低剂量组给予24g/kg/d。大鼠灌胃给药体积为0.1ml／10g。西药对照组给予莫沙必利混悬液0.1ml/10g灌胃，给药剂量为2.5mg/kg/d，每日1次，连续14天。模型对照组、空白对照组不予任何药物，灌服等体积量蒸馏水，每日1次，连续14天。 第15天所有大鼠禁食不禁水24小时，用5%碳末、10%阿拉伯胶悬液按0.1ml／10g灌胃。30min后，将全部大鼠CO2法处死，迅速剖取幽门到直肠末端肠管，测量后分为两部分：一部分用0.9%氯化钠溶液迅速冲净后，置于标本体积10倍以上的4%多聚甲醛中固定；剩余部分置于-80℃冰箱中，备测。 测碳末推进率：测量幽门到碳末前端距离（碳末推进距离）及幽门到直肠末端肠管长度（肠道总长度）。碳末推进率=碳末推进距离（cm）/肠道总长度（cm）X100%。免疫荧光法检测慢传输型便秘大鼠结肠C-kit(C-kit是Cajal间质细胞的特异性标记)表达情况。 第三部分化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠P物质及血管活性肽的影响 分组给药与标本采集方法同第二部分，RT-PCR法检测慢传输型便秘大鼠结肠SP和VIP mRNA表达情况。 第四部分化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠水通道蛋白1和水通道蛋白3的影响 分组给药与标本采集同第二部分，Western blot法检测慢传输型便秘大鼠结肠AQP1和AQP3蛋白的表达。 结果： 1.化瘀通便汤治疗慢传输型便秘的临床研究 两组在性别、年龄、病程等方面无统计学差异（Pgt;0.05）,组间条件均衡可比。治疗组和对照组治疗前后自身总积分比较有统计学差异（Plt;0.01），治疗后两组总积分比较有统计学差异（Plt;0.01），治疗组总积分降低幅度比对照组大，提示两组治疗均有效。治疗组总有效率为78.1%，对照组总有效率为71.0%，两组临床疗效有统计学差异(Plt;0.05），治疗组疗效优于对照组。 2.慢传输型便秘大鼠模型的制备 第一轮循环共计24天，大黄剂量递增至21mg／(10g·d)；第二轮循环共计31天，大黄剂量递增至37mg／(10g·d)；第三轮循环共计32天，大黄剂量递增至57mg／(10g·d)。整个实验进行三轮循环，共计87天。与空白对照组比较，模型组大鼠体质量增长较少（Plt;0.05），大鼠粪便有裂痕、变短，毛发发灰、晦暗，不爱活动。模型组大鼠首次排黑便时间延长（Plt;0.05）。模型组大鼠24小时粪便重量轻（Plt;0.05）。 3.化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞的影响 与空白对照组比较，模型对照组C-kit(C-kit是Cajal间质细胞的特异性标记)表达显著降低（Plt;0.01），说明模型对照组C-kit数量显著降低。各给药组与模型对照组比较，C-kit不同程度升高（Plt;0.01），其中化瘀通便汤高剂量组与西药对照组升高程度大，说明各治疗组药物均能不同程度上调C-kit数量，化瘀通便汤高剂量组与西药对照组对上调C-kit数量作用明显。与西药对照组比较，化瘀通便汤高剂量组C-kit表达无差异（Pgt;0.05），化瘀通便汤低、中剂量组C-kit表达有差异（Plt;0.05），说明化瘀通便汤高剂量组与西药对照组对C-kit数量影响相当，化瘀通便汤低、中剂量组影响C-kit数量不明显。 4.化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠P物质及血管活性肽的影响 4.1P物质表达比较 与空白对照组比较，SP模型对照组目的基因与内参基因积分光密度比值明显升高（Plt;0.01），说明模型对照组SP含量显著增高。与模型对照组比较，各治疗组SP积分光密度比值不同程度降低（Plt;0.01），其中化瘀通便汤高剂量组与西药对照组积分比值降低程度大，说明各治疗组药物均能不同程度降低SP含量，化瘀通便汤高剂量组与西药对照组对降低SP含量作用明显。与西药对照组比较，化瘀通便汤中、高剂量组SP积分光密度比值无差异（Pgt;0.05），化瘀通便汤低剂量组SP积分光密度比值有差异（Plt;0.05），说明化瘀通便汤中、高剂量组与西药对照组降低SP含量作用无差异，化瘀通便汤低剂量组降低SP含量不明显。 4.2血管活性肽表达比较 与空白对照组比较，VIP模型对照组目的基因与内参基因积分光密度比值明显降低（Plt;0.01），说明模型对照组VIP含量显著降低。与模型对照组比较，化瘀通便汤中、高剂量组与西药对照组VIP积分光密度比值不同程度升高（Plt;0.01），其中化瘀通便汤高剂量组与西药对照组积分比值升高程度大，说明各治疗组药物（除低剂量组）均能不同程度升高VIP含量，化瘀通便汤高剂量组与西药对照组对升高VIP含量作用明显。 5.化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠水通道蛋白1和水通道蛋白3的影响 与空白对照组比较，模型对照组AQP1和AQP3相对灰度值表达显著升高（Plt;0.01），说明模型对照组AQP1和AQP3含量显著增高。各给药组与模型对照组比较，AQP1和AQP3相对灰度值不同程度降低（Plt;0.01），其中化瘀通便汤高剂量组与西药对照组相对灰度值降低程度大，说明各治疗组药物均能不同程度降低AQP1和AQP3含量，化瘀通便汤高剂量组与西药对照组对降低AQP1和AQP3含量作用明显。 结论： 1.化瘀通便汤在临床上应用疗效显著 临床常见便秘血瘀证患者，活血化瘀、解毒通络的中药复方化瘀通便汤在临床上应用，疗效显著。 2.大黄粉可成功制备慢传输型便秘大鼠模型 大黄粉制备慢传输型便秘大鼠模型，符合患者疾病形成过程，可以成功复制，供进一步动物实验使用。 3.慢传输型便秘大鼠便秘的发生可能与结肠组织中ICC、SP、VIP、AQP1及AQP3变化有关 慢传输型便秘大鼠便秘的发生可能与结肠组织中ICC、VIP表达降低有关，与结肠组织中SP、AQP1及AQP3的表达升高有关。 4.化瘀通便汤影响慢传输型便秘大鼠结肠ICC、SP、VIP、AQP1及AQP3的表达 化瘀通便汤影响慢传输型便秘治疗STC的机制可能与上调结肠组织中ICC、VIP，下调结肠组织中的SP、AQP1及AQP3的表达有关。 5.化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠ICC、SP、VIP、AQP1及AQP3间相互影响的关联性及具体机制值得深入研究 本文从临床研究及实验研究两部分，分别对化瘀通便汤治疗血瘀型慢传输型便秘进行研究。临床研究部分注重临床疗效的观察，实验部分多种机制联合探讨化瘀通便汤治疗血瘀型慢传输型便秘的假说。化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞、P物质、血管活性肠肽及水通道蛋白间相互影响的关联性及具体机制值得进一步深入研究。
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