电针对昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠肝脏Clock、Bmal1表达的研究

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中文摘要：目的：探究电针干预对昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠昼夜节律影响，以肝作为主要研究组织，观察Clock与Bmal1的mRNA及蛋白表达，揭示针刺肝俞对昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠的作用机制。方法：采用视频记录的方法对实验动物自发活动及站立进行监测和记录。共C57BL/6J小鼠72只，将72只小鼠随机分成四组，空白组、模型组、针刺肝俞组、针刺非经非穴组，每组18只。按照光照同步驯化（Light:08:00-20:00Dark:20:00-08:00）7天，驯化结束后，采取光暗交替L∶D=2∶2造模5天，之后恢复自然光照L∶D=12∶12。造模成功后，在每天15:00开始针刺，连续5天，针刺10小时候后开始取材（即第二天02:00），每4小时在每组处死3只小鼠取肝脏。针刺组频率2/15Hz，电流0.2mA，4-20HZ，每次15分钟，每天电针1次，连续电针5天；造模组不针刺，只捆绑；针刺非经非穴组，捆绑加针刺非经非穴。采用PCR法检测各组动物肝脏内的Clock和Bmal1基因mRNA的表达水平，同时用R软件通过余弦定理证明各组基因的节律性，用WesternBlot法检测各组小鼠肝脏内的Clock和Bmal1的蛋白表达量。结果：针刺肝俞组Clock与Bmal1的mRNA表达恢复节律，具有统计学意义(P＜0.05），模型组Clock与Bmal1的mRNA表达无节律性,无统计学意义(P＞0.05)。针刺肝俞组与模型组比较站立次数明显减少，统计学具有意义（P＜0.05）。WesternBlot蛋白检测发现，针刺肝俞组肝脏内Clock、Bmal1的蛋白相对表达含量较模型组明显降低，统计学具有意义（P＜0.05）。结论： 1针刺肝俞后恢复了昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠肝脏内Clock、Bmal1的节律性，非经非穴组与模型组Clock、Bmal1未恢复节律性，说明针刺肝俞可以恢复时钟基因Clock、Bmal1昼夜节律性。 2WesternBlot蛋白检测，针刺肝俞后，肝脏内Clock、Bmal1的蛋白相对表达含量与模型组和非经非穴组比较降低，针刺后可以降低Clock、Bmal1蛋白表达量，蛋白表达降低可能是改变小鼠节律的因素。 3针刺肝俞后，昼夜节律紊乱小鼠的自发站立次数与空白组接近一致，小鼠的活动次数与站立次数下降，说明电针可以改变昼夜节律紊乱小鼠活动度和站立次数升上的趋。 4针刺对昼夜节律紊乱小鼠肝脏内生物种基因Clock、Bmal1的下调作用可能是针刺发挥调节作用的分子机制之一。

作者：

王畅

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关键词：

昼夜节律紊乱电针干预 Clock Bmal1 动物实验

授予学位：

硕士

学科专业：

针灸推拿学

导师：

樊旭

学位年度：

2018

学位授予单位：

辽宁中医药大学

语种：

中文

中图分类号：