摘要
背景 巨噬细胞在骨关节炎（OA）疾病进程中起着重要作用。目前，寻找合适的药物通过影响巨噬细胞极化，改善关节免疫微环境，从而达到控制炎症和促进组织修复再生，已经成为OA新的干预措施和治疗策略。富组蛋白1（Histatin1，Hst1）是一种主要由唾液腺分泌的低分子抗菌肽，具有多种活跃的生物学功能。现有研究显示Hst1具有抗炎及促进软骨组织修复作用，促使我们探究其在OA治疗中的应用潜力。 目的 本项目拟探究Hst1对OA的治疗潜能及其机制。 材料与方法 1.采用碘乙酸钠（MIA）诱导的大鼠膝关节炎（KOA）模型，通过Micro-CT扫描、HE染色、番红-固绿染色、免疫组化分析Hst1对KOA的治疗作用。 2.采用小鼠背部急性气囊滑膜炎模型，通过ELISA和HE染色评价Hst1处理对LPS诱导的体内炎症反应影响。 3.采用CCK-8检测不同浓度Hst1处理对ATDC5软骨细胞和RAW264.7巨噬细胞的增殖活性的影响。 4.采用ELISA、RT-qPCR、WesternBlot、共聚焦观察和流式细胞术检测Hst1处理对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应和极化的影响。 5.采用高通量基因测序、WesternBlot探索并验证Hst1调节巨噬细胞M1/M2极化转换的机制。 6.采用CCK-8、RT-qPCR、WesternBlot、Transwell迁移实验、阿利新蓝染色、番红O染色和流式细胞术分析巨噬细胞条件培养液（CM）处理对ATDC5软骨细胞增殖、迁移、分化和凋亡的影响。 结果 1.Hst1缓解了MIA诱导的大鼠KOA，升高了BV、BV/TV、Tb.N水平，降低了Tb.Sp水平，促进了骨与软骨修复，降低了巨噬细胞浸润。 2.Hst1降低了LPS诱导小鼠背部急性气囊滑膜的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平，减少了气囊滑膜组织炎症细胞浸润和变厚。 3.Hst1以时间、浓度依耐性促进了ATDC5细胞和RAW264.7细胞增殖活性。 4.Hst1降低了LPS诱导的RAW264.7细胞M1极化相关标志物CD86、iNOS表达，促进了M2极化相关标志物IL-10、CD206、Arg-1表达。 5.高通量基因测序显示差异表达的mRNA主要与NF-κB和ERK1/2信号通路相关；Hst1降低了NF-κB、IKB-α、ERK、JNK和P38的蛋白磷酸化水平。 6.Hst1处理后的CM促进了ATDC5细胞增殖、迁移、分化；促进了成软骨相关标志物Col-2、Sox-9和Aggrecan的表达；抑制了软骨破坏相关标志物MMPs表达；降低了细胞凋亡水平。 结论 1.Hst1具有炎症抑制，减少炎症细胞浸润作用。 2.Hst1具有通过抑制NF-κB/MAPK信号通路调节巨噬细胞M1/M2极化转换的作用。 3.Hst1具有调控免疫微环境促进软骨细胞增殖、迁移、分化及减少凋亡的作用。 4.Hst1是治疗OA潜在的有效候选药物。
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