摘要
目的： 脊髓损伤（Spinalcordinjury，SCI）致残率高，临床治疗时间长，但治疗效果差，给社会和患者带来了极其沉重的负担。过去认为脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生并分泌大量的GFAP和CSPG，最终形成的胶质瘢痕是轴突再生的主要障碍。但最近的研究表明，相较于胶质瘢痕，以巨噬细胞和成纤维细胞为主要效应细胞及其沉积的层粘连蛋白（laminin，LN）、纤连蛋白（fibronectin，FN）等细胞外基质蛋白形成的纤维瘢痕对轴突再生的抑制作用似乎更强。减少纤维瘢痕，能对SCI后神经功能恢复有促进作用。目前减少纤维瘢痕的方法基本都涉及酶转化、基因敲除等方法，操作复杂，条件要求高。因此寻找一种操作简便、相对容易的干预方法来减少纤维瘢痕很有必要。本研究探讨大麻素受体2激动剂对大鼠脊髓损伤后纤维瘢痕形成的作用及机制。 方法： 1.建立大鼠脊髓损伤背侧半切模型。 2.实验动物进行分组，分为假手术组、载体（生理盐水）组、大麻素受体2（Cannabinoidreceptor2CBR2）激动剂AM1241组和AM1241+CBR2拮抗剂AM630组。术后进行小动物7.0TMRI的检查，药物干预14天后，于第28天进行脊髓取材、切片。进行纤维瘢痕主要标记物，包括PDGFRβ、层粘连蛋白（laminin）、纤连蛋白（fibronectin）免疫荧光染色及层粘连蛋白、纤连蛋白、GFAP的WB检查。测量PDGFRβ、层粘连蛋白和纤连蛋白免疫染色阳性区域所占百分数，层粘连蛋白、纤连蛋白、GFAP的蛋白表达量，评估AM1241对纤维瘢痕形成的作用。 3.于术后第1、3、7、14、21、28天，按照分组进行BBB(BassoBeattieBresnahan)评分、斜板实验行为学检查，术后第28天进行tublinβⅢ染色、神经丝（Neurofilament）染色、电生理检查感觉诱发电位和运动诱发电位，评估其对神经细胞保护及神经功能恢复的作用。 4.术后第14天采用ELISA检测相关细胞因子浓度及CD68细胞免疫荧光染色，探讨其影响纤维瘢痕形成的可能作用机制。 结果： 1.纤维瘢痕标记物PDGFRβ、层粘连蛋白、纤连蛋白免疫荧光染色显示：CBR2激动剂AM1241减少了脊髓损伤后的纤维瘢痕面积。PDGFRβ、纤连蛋白、GFAP的WB显示：CBR2激动剂AM1241降低了脊髓损伤后PDGFRβ和纤连蛋白主要纤维瘢痕成分蛋白的表达。但上述结果被CBR2拮抗剂AM630所逆转。 2.tublinβⅢ荧光染色、Neurofilament荧光染色、行为学评估（BBB评分、斜板实验）、电生理实验（SEP、MEP）结果显示CBR2激动剂AM1241的应用增加了tublinβⅢ和Neurofilament的阳性染色，改善了行为学检查结果，缩短了感觉诱发电位（sensoryevokedpotential，SEP）的潜伏期，增大了运动诱发电位（motorevokedpotential，MEP）的波幅。上述结果提示：CBR2激动剂AM1241增加了脊髓损伤后的神经细胞存活，改善了脊髓损伤后的神经功能，但该结果可被CBR2拮抗剂AM630所逆转。 3.Elisa实验及CD68细胞的免疫荧光染色提示：CBR2激动剂AM1241抑制了M1型巨噬细胞iNOS、TNF-α、IL-1β的表达，增强了M2型巨噬细胞CD206、Arg-1的表达，减少了TGF-β1的表达，减少了CD68+细胞的聚集。上述结果提示：CBR2激动剂AM1241减少了脊髓损伤后M1型巨噬细胞的表达，增强了M2型巨噬细胞的表达。该结果被CBR2拮抗剂AM630所逆转。 AM1241组与载体组、AM1241+AM630组存在统计学差异的结果见表1。 结论： 刺激大麻素受体2减少了脊髓损伤后纤维瘢痕，增加了神经元的存活，改善了神经功能。CBR2激动剂在脊髓损伤后表现出抗炎作用，减少了M1型巨噬细胞的表达，增加了M2型巨噬细胞的聚集。CBR2激动剂减少脊髓损伤后纤维瘢痕，改善脊髓损伤后神经功能，这一作用可能是通过抗炎作用，影响巨噬细胞的极化来实现的。这种作用可被CBR2拮抗剂所逆转。证明CBR2激动剂在脊髓损伤后可作为减少纤维瘢痕的一种操作简便的干预方法。
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