摘要
目的本研究旨在通过结合体内外实验探讨Drp1选择性抑制剂Mdivi-1对脑出血（ICH）大鼠继发性损伤引起的线粒体分裂/融合、神经元死亡、神经功能缺损和学习记忆能力障碍的影响，并对其潜在机制进行初步探索，以期找寻新的治疗靶点。 方法通过右侧基底节区自体动脉血注入法建立大鼠ICH模型，在ICH术后30min通过腹腔注射的方法注入Mdivi-1作为实验组，相应地注入DMSO盐溶液作为对照组。并在术后不同时间分别处死大鼠，其中脑组织含水量及行为学处理的大鼠处死时间分别为术后3d和21d。采用体外Hemin诱导法构建神经元损伤的ICH细胞模型。首先利用免疫印迹法（WesternBlot）评估ICH后大鼠Drp1、p-Drp1(Ser616、Ser637)蛋白含量的变化，以选择Drp1及磷酸化Drp1表达高峰时相作为后续实验观测点；应用Westernblot和HE染色研究不同剂量给药组效果以筛选治疗剂量。在上述实验的基础上，采用HE、Nissl染色及脑含水量评估ICH大鼠出血性脑组织损伤；体外细胞实验通过流式细胞仪检测细胞凋亡观察神经元损伤；应用免疫组织化学染色、免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察出血灶周围脑组织Drp1蛋白表达水平；采用Westernblot分别检测大鼠血肿周围脑组织胞浆、线粒体及离体神经元细胞中线粒体相关蛋白Drp1，p-Drp1(Ser616)，p-Drp1(Ser637)，Fis1及Mfn1/2的表达。最后，为了评估抑制剂Mdivi-1是否通过以上途径改善ICH后大鼠的预后，采用神经功能评分（mNSS）及行为学实验（Morris水迷宫实验）对ICH后大鼠的神经功能及空间学习记忆情况进行检测。 结果（1）ICH组Drp1和p-Drp1(Ser616)蛋白表达量均先从1h开始升高至6h后下降，于12h逐步回升，并在48h时达到顶峰。而p-Drp1(Ser637)蛋白表达则在24h开始出现不同趋势（Plt;0.05）。（2）与ICH组相比，3mg/kg剂量组Drp1表达含量显著减少，HE染色组织水肿减轻和变性神经元减少（Plt;0.05）。（3）ICH后血肿周围脑组织出现水肿、神经元变性及炎性浸润，Mdivi-1处理后，显著改善了ICH诱导的脑组织损伤程度（Plt;0.05）。（4）ICH诱导了神经元的凋亡，而Mdivi-1能够挽救神经元的死亡（Plt;0.05）。（5）ICH引起的线粒体相关蛋白Drp1，p-Drp1(Ser616、Ser637)，Fis1及Mfn1/2的表达发生变化，Mdivi-1处理后能逆转这些改变，但对Mfn1无明显影响（Plt;0.05）。（6）ICH引起神经功能及空间学习记忆功能障碍等改变，Mdivi-1处理后可逆转这些改变（Plt;0.05）。 结论Mdivi-1能够通过特异性抑制Drp1的表达，改善ICH大鼠神经功能缺损和空间学习记忆障碍；其机制可能通过调节线粒体分裂/融合平衡稳态、抑制神经元凋亡来实现，这可为ICH的精准靶向治疗提供新的实验依据和治疗策略。
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