针刺百会穴通过BDNF-ERK-CREB信号通路治疗孤独症的机制研究

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中文摘要：目的: 研究发现脑神经营养因子(Brain-derivedNeurotrophicFactor，BDNF)、BDNF-ERK-CREB信号通路与孤独症的发病密切相关，基于中医“肾-髓-脑”理论，我们认为针刺可以通过“经络-神经-内分泌”网络，调节BDNF及BDNF-ERK-CREB信号通路，达到治疗孤独症的效果。本研究通过观察针刺百会穴后孤独症模型大鼠行为学、海马突触后密度蛋白95(Postsynapticdensityprotein95，PSD-95)蛋白表达及海马区BDNF、CREBmRNA表达的变化,探讨针刺百会穴治疗孤独症的机制。方法: 采用孕鼠腹腔注射丙戊酸钠(ValproicAcid，VPA)的方法造模，取造模成功孤独症仔鼠36只，将其分为针刺组、模型组和ANA-12组，每组12只;另取正常生产的仔鼠12只作为空白对照组。针刺组采用0.5寸前斜刺2mm，捻转补法，每次留针30min，15min行针1次，自仔鼠P28d开始，每日1次，连续治疗21天;各组实验鼠均按同等条件饲养。随后通过超声发声、三箱社交、埋珠实验、旷场实验、新物体识别、高架十字迷宫实验观察各组实验鼠行为学的差异;应用免疫组化技术观察各组实验鼠海马PSD-95蛋白表达的差异;通过RT-qPCR方法观察各组实验鼠海马区BDNF、CREBmRNA表达的差异。结果: ①与正常对照组相比，孤独症模型组和ANA-12组实验鼠存在社交沟通缺陷，刻板行为，焦虑程度重以及学习记忆能力受损，并且除学习记忆能力外ANA-12组表现出的症状更加明显，与模型对照组相比，针刺组实验鼠存在社交沟通能力增强，刻板行为减少，焦虑程度轻以及学习记忆能力增加。孤独症模型大鼠的一般探索能力减少，但其它各组间大鼠未见显著差异。 ②免疫组化技术观察到与正常对照组比较，模型对照组和ANA-12组海马区的PSD-95阳性表达降低(P＜0.05)，与模型对照组比较，针刺组海马区PSD-95阳性表达显著增高(P＜0.05)，而ANA-12组海马区PSD-95阳性表达降低(P＜0.05)。 ③RT-qPCR的结果显示，模型对照组、针刺组、ANA-12组大鼠海马区BDNF、CREBmRNA相对表达量明显减少(P＜0.05)。与模型对照组比较，针刺组的海马区BDNF、CREBmRNA表达量提高(P＜0.05)，而ANA-12组海马区BDNF、CREBmRNA表达量呈下降趋势(P＜0.05)。结论: ①产前暴露VPA能诱导SD大鼠产生自闭症样行为，并伴随海马区突触可塑性相关蛋白PSD-95蛋白以及BDNF、CREBmRNA表达减少;②针刺百会穴治疗孤独症的可能机制是提高了VPA模型大鼠PSD-95蛋白以及BDNF、CREBmRNA的表达，有效提高VPA模型鼠BDNF蛋白表达，改变突触可塑性，使孤独症大鼠的自闭症样行为改善，起到治疗作用;③引入了BDNF/TrkB通路的特异性拮抗剂ANA-12，发现ANA-12组海马区PSD-95蛋白的表达以及BDNF、CREBmRNA表达呈下降趋势，社交缺陷、重复刻板行为、焦虑程度表现的更为为严重，进一步验证孤独症的发病与BDNF-ERK-CREB信号通路密切相关。

作者：

成慧

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关键词：

孤独症针刺疗法百会穴脑源性神经营养因子环磷酰胺反应元件结合蛋白突触后致密物95

授予学位：

硕士

学科专业：

康复医学与理疗学

导师：

李恩耀

学位年度：

2022

学位授予单位：

郑州大学

语种：

中文

中图分类号：

R74