摘要
目的 探索基于在体基因信息评估规范治疗下脑胶质瘤患者预后的临床应用价值。 方法 纳入2016年7月至2021年12月郑州大学人民医院接受诊治且符合条件的68例脑胶质瘤患者，其中男性35例，女性33例;中位年龄51岁(7-78岁);所有患者均行手术切除及病理组织活检，其中WHO分级Ⅳ级40例，Ⅲ级17例以及Ⅱ级11例;组织分型包括GBMIDH野生型31例，GBMIDH突变型7例，星形胶质瘤细胞瘤14例，少突胶质细胞瘤14例，1例H3K27M突变型弥漫中线胶质瘤，1例间变室管膜瘤;按IDH状态分为IDH野生型41例和IDH突变型27例。并于术腔植入肿瘤原位液采样监测诊疗器，术后接受放疗联合TMZ同步化疗序贯以TMZ辅助化疗联合瘤腔局部化疗，在患者诊疗过程中通过采样监测诊疗器收集肿瘤原位液(tumorin-situfluid,TISF)标本，患者肿瘤组织标本为术中获得或术后通过未经染色的肿瘤病理白片获取。本研究共收集了68例脑胶质瘤患者的57个原发肿瘤组织样本及94个TISF标本，另抽取每位患者血液标本5ml进行胚系DNA对照。获取的标本经提取肿瘤来源DNA后进行二代测序。与临床资料结合，对脑胶质瘤患者组织与TISF检测结果进行对比及分子信息学分析。 结果 1、在肿瘤组织和术后不同时期TISF中，检出的突变数目、种类及突变基因平均变异等位基因频率（meanVariantAlleleFrequency，mVAF）均不相同。 2、患者无复发生存时间（Relapse-FreeSurvival，RFS）与TISF中突变基因mVAF相关，更高的mVAF预示相对较短的RFS(风险比，4.058;95％CI，1.089～15.12;P=0.0012)，而与基因突变数目和突变基因最大VAF无关。在胶质瘤组织中观察到同样的结果(风险比，2.214;95％CI，1.003～4.887;P=0.0165)。 3、对比患者治疗前基线TISFctDNA和对应脑胶质瘤组织突变基因mVAF，显示胶质瘤组织和术后早期TISF存在显着统计学差异(中位数:0.39％VS39.98％，p＜0.0001)。贝伐珠单抗靶向治疗前后影像学上大幅缓解，但TISF中突变基因mVAF呈上升趋势，且治疗前后mVAF对比，差异无统计学意义(P=0.1819)。 4、在队列中共检出3例超突变患者，发生率4.4％，突变数目介于132-189个，突变方式以G:C＞A:T点突变为主，同时伴有MMR基因缺陷(包括MSH2，MSH6，MLH1和PMS2)，在对应肿瘤组织中均未发现MMR相关基因突变，证实为TMZ治疗期间诱导的脑胶质瘤耐药超突变。 结论 1、通过对TISF进行连续测序，可实时表征人脑胶质瘤治疗压力下不同阶段的在体基因演进信息。 2、更高的mVAF预示相对较短的RFS，而与基因突变数目和突变基因最大VAF无关，通过对肿瘤组织及TISF测序，基于在体基因信息可精准评估规范治疗下脑胶质瘤患者预后。 3、肿瘤组织和术后早期TISF存在显着差异。通过对比贝伐珠单抗靶向治疗前后TISF监测结果，可真实反映治疗分子反应。 4、治疗期间，TMZ通过诱导MMR基因缺陷，进而导致肿瘤基因发生超突变，实时监测脑胶质瘤在体基因，可及时发现TMZ治疗期间诱导的脑胶质瘤耐药超突变。
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