摘要
一、研究背景 骨质疏松症(osteoporosis，OP)患病率逐年升高，在我国的发病率位于慢性疾病的第3位，于心血管疾病、糖尿病之后，严重危害中老年人的身体健康。治疗骨质疏松症的药物在近些年取得了巨大的发展，然而这些药物仍然存在一些问题有待解决，发现新的方法具有一定的意义。 目前大部分的研究认为，骨髓腔脂肪量和骨量之间成反比关系。在骨髓中，骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMMSCs)扮演着分化为骨髓脂肪细胞和成骨细胞的角色。很多证据证明，抑制BMMSCs成脂分化可能有望成为潜在治疗骨质疏松症的方法之一。 Omega-3类长链多不饱和脂肪酸被认为在我们人体内具有高度的生物活性。其中，名为二十碳五烯酸(EicosapentaenoicAcid，EPA)的一种长链多不饱和脂肪酸，其普遍存在于海洋动物和植物体内，被研究发现在很多疾病中展现出潜在的应用价值，其中包括在骨骼健康方面。 二、研究目的 探讨不同浓度EPA对C57BL/6J小鼠BMMSCs活性及成脂分化能力的影响，论述在细胞水平上EPA对骨质疏松症的治疗和预防意义。 三、研究内容 1、将不同浓度EPA加入到BMMSCs中共培养24h，与空白对照组对比，检测其对BMMSCs活性的影响。 2、采用油红O染色法观察不同浓度的EPA对BMMSCs分化为脂肪细胞数量的影响。 3、利用光学显微镜观察不同浓度的EPA对BMMSCs分化的脂肪细胞内脂滴融合状态的影响。 4、采用RT-qPCR法检测不同浓度的EPA对BMMSCs成脂分化过程中基因过氧化物酶体激活受体γ(PPARγ)及基因CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)表达的影响。 5、采用Western-Blot法检测不同浓度的EPA对BMMSCs成脂分化过程中PPARγ蛋白和脂肪组织脂肪酸结合蛋白(FABP4)表达的影响。 四、研究结果 1、使用30μM、60μM的浓度EPA处理BMMSCs24h后有明显的促进增殖的作用，具有统计学差异(P＜0.001);而150μM、200μM及300μM的浓度对BMMSCs活性有明显的抑制作用，具有统计学差异(P＜0.001)。 2、对BMMSCs成脂分化诱导第7d时，60μM组和空白对照组相比，脂肪细胞数量未见明显差异;而100μM浓度组与空白对照组相比，脂肪细胞数量明显减少。 3、在光学显微镜观察下，EPA成浓度依赖式抑制BMMSCs分化的脂肪细胞内脂滴的融合。 4、对BMMSCs成脂诱导第7d时，60μM组和空白对照组相比，PPARγ基因的表达显著被抑制(P＜0.05)，而C/EBPα基因的表达未见明显影响;100μM组和对照组相比，基因PPARγ(P＜0.01)和基因C/EBPα(P＜0.05)的表达均被明显抑制。 5、对BMMSCs成脂诱导7d后，60μM组和对照组相比，PPARγ蛋白和FABP4蛋白的表达均没有显著性差异;而100μM组和对照组相比，PPARγ和FABP4蛋白的表达均被明显抑制(P＜0.001)。 五、研究结论 在这项研究中，我们得出结论:EPA可以抑制BMMSCs成脂诱导分化为脂肪细胞和脂肪细胞内脂滴的融合，为EPA在骨质疏松症的药物研发方面提供新的证据。
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