摘要
急慢性炎症反应被认为与动脉粥样硬化、肥胖、糖尿病、心脑血管疾病、甚至于癌症许多重大的、难治愈性的疾病有密切关系。而当归在临床上用于血虚及血瘀等妇科疾病，在心脑血管缺血性疾病、抗动脉粥样硬化、降血脂、抗血栓等疾病均有较好疗效，此外还常用于支气管炎、关节炎、溃疡性结肠炎等多种炎性疾病。本研究拟利用天然产物化学研究手段，从当归中分离具有抗炎作用的活性成分并结合纳米载药系统，以期提高当归有效成分的生物活性和改善其生物利用度，为当归苯酞类成分的进一步开发利用提供研究基础。 通过薄层色谱法，硅胶柱层析和高效液相制备色谱等一系列色谱分离方法，本研究从当归中共分离得到7个单体化合物，包括4个简单苯酞类化合物Z-ligustilide(1),E-ligustilide(2),3-Butylphthalide(3),n-Butylidenephthalide(4)和3个二聚体类苯酞化合物Angeolide(5)，TokinolideA(6)，TokinolideB(7)。 通过药物活性筛选实验研究发现，苯酞类成分具有一定抗炎活性，其中以化合物4和7效果较为明显，但由于苯酞类化合物极性偏小，存在的选择性差、水溶性差、毒副作用大等问题，本实验拟通过将小分子药物丁烯基苯酞(n-Butylide-nephthalide，BP)和TokinolideB(TB)搭载MSN-SS-PDA纳米载药平台以提高其溶解性和生物利用度。其中富含酚类的聚多巴胺(Polydopamine，PDA)作为一种自由基清除剂，可以清除炎症反应中产生的活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)，可与BP协同起到双重抗炎的作用。此外，本实验将进一步研究苯酞及其搭载的双重生物响应BP或TB@MSN-SS-PDA纳米载药系统的抗炎作用机制。 纳米载药系统的实验已制备得到了粒径约为60nm球形的MSN-SS-PDA载体，且采用MSN-SS-PDA载体包裹BP和TB后，可使BP的负载率达到8.92％，TB的包载率为4.8％，水溶性明显得到改观;BP和TB可在谷胱甘肽和酸响应下双重释放，12h、24h、48h的释放率分别为43％、58％、66.5％，为TB/BP@MSN-SS-PDA的抗炎功效奠定了基础。 CCK-8实验结果表明，BP和BP@MSN-SS-PDA的细胞毒性不太明显，同时说明BP@MSN-SS-PDA具有良好的生物安全性，为后续抗炎活性实验打下了坚实的基础。Westernblotting实验结果显示，浓度为50μM的BP和100μg/mL的BP@MSN-SS-PDA(包载了47.5μMBP)对脂多糖(Lipopolysaccha-ride，LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的炎症反应具有显著抑制作用。同时，BP和BP@MSN-SS-PDA对NF-κB和IκBα降解的抑制作用呈浓度依赖性。此外，药物浓度基本相同的情况下，BP@MSN-SS-PDA的抗炎活性要优于BP单体。 综上所述，本课题所制备的TB/BP@MSN-SS-PDA双重生物响应纳米载药平台能够实现对BP和TB的高效负载，并与BP和TB等苯酞类化合物协同起到双重抗炎作用，这为BP和TB等苯酞类化合物治疗炎症疾病提供了一种新思路。
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