摘要
盐度是影响鱼类的生长发育的重要环境因子。盐度不仅影响硬骨鱼类生存、繁殖、渗透调节、离子转运和激素分泌等生理过程，也对响鱼类的免疫稳态有着重要影响。金钱鱼(Scatophagusargus)是一种的广盐性硬骨鱼类，对盐度波动具有极强的耐受能力。与正常海水养殖相比，金钱鱼在低盐度(5ppt)条件下生长更快。然而，尚未从分子水平上完全了解金钱鱼对盐度变化的免疫应答。因此，本项目拟研究1龄金钱鱼(150g~259g)在高盐(35ppt）、对照组(25ppt）和低盐(5ppt）处理下的血清生理生化指标水平和免疫相关基因表达水平的影响，从免疫角度阐明金钱鱼对环境盐度的适应性机理，研究结果可为开展金钱鱼低盐淡化养殖提供理论依据。研究结果如下： 1.盐度处理对金钱鱼生化指标及抗氧化基因表达的影响 （1）对高盐和低盐处理3h、6h、12h、24h、48h、10d、22d后的金钱鱼血清生理生化指标检测发现：高盐或低盐（6h和12h）处理后，甘油三脂含量显著升高，高盐处理22d时，甘油三脂含量显著下降。高度处理12h和48h后，血糖的含量升高，在10d时下降。高盐和低盐处理24h后，总蛋白水平均显著低于对照组。（2）高盐处理12h、10d或低盐处理24h和10d后，C3含量显著低于对照组。高盐处理6h、12h、24h、10d或低盐处理12h后，C4含量显著低于对照组。盐度处理对血清中IgM的含量没有影响。（3）头肾中，高盐处理6h和12h后，sod基因表达水平出现下调；低盐处理6h和12h后，sod基因表达下调，而在24h和48h时又显著上调。脾脏中，高盐处理6h后，sod基因表达下调，而12h、24h和48h时，其表达水平逐渐上调。在高盐和低盐处理早期(3h)，头肾和脾脏中的cat基因表达水平出现上调。 2.盐度处理下金钱鱼头肾转录组分析及免疫相关基因的筛选和表达 （1）对高盐和低盐处理22d后的头肾进行转录组测序后发现，与对照组相比较，低盐组共获得22个差异表达基因，高盐组共获得365个差异表达基因。KEGG分析鉴定了NOD样受体信号传导通路和MAPK信号通路等免疫相关通路；共筛选到了mmd2、rnf165-like、cd27、c3-like、ccr7、lgt、ci-mpr、lgl、lamp2、mr1、il-1β等与免疫调节相关基因。（2）qPCR结果显示，ck10基因在高盐处理3h、12h和22d后表达上调。cd27基因在高盐处理3h和22d后，表达水平上调。il-1β基因在高盐处理3h、10d和22d后表达上调；低盐处理6h后表达下调，但在22d时表达上调。 3.盐度处理下金钱鱼脾脏转录组分析及免疫相关基因的筛选和表达 （1）对高盐和低盐处理22d后的脾脏进行转录组测序后发现，与对照组相比较，低盐组共获得个37差异基因，而高盐组共获得188个差异表达基因。KEGG分析鉴定了吞噬体通路、MAPK信号通路和IgA生成相关肠道免疫网络信号通路等免疫相关通路；共筛选到了il-17d、lgt、traf2、igm、itsn2、c8g、hsp90、trim21、hsp70a、il-1β等与免疫相关基因。（2）qPCR结果显示，高盐处理后il-17d基因表达水平在各时间点显著上调；低盐处理后，il-17d基因在6h、12h表达下调，在10d时出现上调。高盐和低盐处理后，c8g基因在3h时表达上调，在10d和22d时表达下调。高盐条件下，il-1β基因在3h、10d和22d时表达上调，在48h时表达下调；低盐条件下，il-1β基因在24h和48h表达下调，在22d时表达上调。 综上所述，环境盐度对金钱鱼血清生化指标和抗氧化基因的表达有显著性影响；头肾和脾脏转录组分析富集到部分与免疫相关的通路，鉴定了部分与环境盐度适应的相关基因；qPCR表明，头肾中ck10、cd27、il-1β基因在长期盐度适应中具有重要作用；脾脏中il-17d、c8g和il-1β基因在急性和长期盐度适应中具有重要作用。研究结果可为金钱鱼盐度适应和开展低盐淡化养殖提供理论依据。
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