摘要
目的:探索罕见病肝豆状核变性的快速鉴定流程并完成家系溯源，为进一步明确铜代谢障碍导致病理炎症反应的肝豆状核变性的临床诊断;探讨研究罕见病肝豆状核变性早期家系筛查对遗传病史家族的健康管理和遗传咨询的价值。 方法:提取先证者Ⅲ-3DNA并构建高通量测序文库，通过二代测序初步鉴定肝豆状核变性可能致病位点;进行可能致病位点区域的上下游序列设计引物，提取包括先证者在内的13位家系成员DNA，对目标片段PCR扩增后进行一代测序，分析突变位点并进行遗传溯源验证;将二代测序技术快速筛查临床疑似患者和一代测序技术双向验证联合。 结果:1、利用二代测序对先证者Ⅲ-3的ATP7B基因外显子8检测测序，发现存在1个杂合错义突变(rs121907990;chr13:51937570)，并与一代测序结果进行对比，显示两种测序方法结果完全一致，成功完成先证者的结果双向验证;2、通过家系筛查对其他家族成员ATP7B基因进行测序，未发现第一代家族成员ATP7B致病基因突变;3、除先证者Ⅲ-3外，第二代和第三代家族成员中共发现3位ATP7B致病基因外显子8点突变携带者，Ⅱ-4，Ⅱ-5，Ⅲ-4均为同一杂合错义突变;4、通过家系溯源研究发现，先证者Ⅲ-3ATP7B突变来源于母系;5、根据临床疑似患者确认测序路线和家系溯源路线构建完成一代二代联合测序技术快速鉴定肝豆状核变性检测方案并绘制出简明流程图。 结论:本研究构建了对罕见病肝豆状核变性基因突变位点的快速鉴定策略，具备双向验证性，具有准确、快速、高效等优势。由临床疑似患者确认测序路线和家系溯源路线组成的鉴定流程图使得联合测序的关键步骤更加清晰，具有可扩展性，可能为其他罕见遗传病基因突变致病位点提供可借鉴的检测模式。
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