摘要
目的：二黄祛脂方（EHQZF）临床上用于治疗非酒精性脂肪肝（NAFLD），但其作用机制未知，本研究主要考察EHQZF治疗NAFLD的关键中药、有效成分、重要靶点和核心机制，并进一步考察EHQZF与其精简方降血脂、治疗脂肪肝的疗效对比，从而简化配方。 方法：通过网络药理学分析EHQZF的各中药归经、成分分布、主要治疗疾病及EHQZF治疗NAFLD的主要成分和作用机制；利用LC-MS对关键有效成分分析定量；通过FFA（OA:PA=2:1）诱导HepG2、WRL68细胞建立NAFLD体外模型，使用油红O染色，考察EHQZF对细胞脂滴的影响；利用高脂饮食造模NAFLD，将ICR小鼠随机分为空白组（CON）、模型组（HFD）、低剂量组（LEH，0.6g·kg-1）、中剂量组（MEH，1.2g·kg-1）、高剂量组（HEH，2.4g·kg-1）和阳性药苯扎贝特组（BZBT，60.67mg·kg-1），除CON组小鼠食用标准饲料外，其余组食用高脂饲料，7周后，灌胃各给药组，每天1次，持续5周，记录小鼠每周体重，第11、12周时，检测小鼠的葡萄糖耐量（IPGTT）、胰岛素耐量（IPITT）和耐寒能力，最后，将小鼠安乐死后，取材检测。通过小鼠的IPGTT、IPITT、体重变化、肝脾系数，脂肪组织的病理变化和UCP1表达、小鼠耐寒实验、血清指标、肝脏的病理变化考察EHQZF对NAFLD小鼠的疗效及机制，通过WesternBlot考察EHQZF对肝脏BCL2、BAD、P-AKT、P-P38MAPK、P-JNK、P-ERK1/2、P-STAT3蛋白表达的影响。利用Tyloxapol诱导小鼠高脂血症（HPL）探讨EHQZF及其精简方QZF-Ⅰ和QZF-Ⅱ在降血脂、减少肝脏脂质积累方面的作用。 结果：网络药理学与LC-MS结果表明，EHQZF可治疗NAFLD、HPL等代谢性疾病，当EHQZF治疗NAFLD时，复方中甘草、丹参、荷叶、大黄、姜黄、虎杖占有重要地位，黄酮类和酚酸类化合物是关键有效成分，EHQZF可通过调节PI3K-AKT、细胞凋亡、JAK-STAT、MAPK等信号通路抗NAFLD，其中AKT1、STAT3、MAPK14、c-JUN、BCL2、BAD等核心靶点与关键有效成分分子对接紧密；NAFLD体内外实验表明，EHQZF在0.39~1.56mg·ml-1和0.78~3.125mg·ml-1时，可以分别降低0.6mMFFA处理的HepG2、WRL68细胞中的脂滴积累（P＜0.01、0.001）；EHQZF可提高小鼠葡萄糖耐量和胰岛素耐量、降低其体质量和肝脾质量（P＜0.01、0.001或P＞0.05）；脂肪组织数据显示，EHQZF可减小附睾脂肪组织（eWAT）质量及脂肪细胞肥大、促进eWAT褐变、增加棕色脂肪组织（BAT）质量、提高eWAT和BAT中的UCP1表达，增加机体产热（P＜0.05、0.01、0.001或P＞0.05）；血清指标显示，EHQZF能明显提高血清中HDL-C水平、降低AST、LDL-c、TG、TC水平（P＜0.05、0.001或P＞0.05）；肝脏病理切片显示，EHQZF可减轻肝脏脂滴蓄积及肝线粒体损伤；WesternBlot结果表明，EHQZF可以显著抑制BAD、P-JNK、P-P38MAPK、P-ERK1/2蛋白表达，显著促进P-AKT、BCL2及P-STAT3蛋白表达（Plt;0.05、0.01或P＞0.05）。EHQZF及其精简方对高脂血症小鼠的疗效对比显示：QZF-Ⅱ（虎杖、姜黄、丹参、荷叶）在提高血清SOD水平、降低TC、ALT、AST水平、减少肝脏IL-1β和IL-6含量（P＜0.01、0.05、0.001），改善肝脏脂滴蓄积方面效果更优。 结论：EHQZF可通过抑制胰岛素抵抗、改善脂肪组织状态，降低肝脏脂质蓄积，抑制MAPK通路，调节Apoptosis通路，减轻肝线粒体损伤、抑制肝细胞凋亡和肝脏炎症，进而缓解NAFLD。
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