摘要
目的： 颈动脉粥样硬化(Carotid atherosclerosis，CAS)是脂质沉积在颈动脉的慢性炎症。CAS进展过程十分缓慢，可从青壮年起病，随着年龄增长，粥样斑块不断进展，动脉内膜逐渐增厚导致管腔狭窄，病变过程进展至中老年，富含胆固醇结晶的斑块突然发生破裂，导致动脉内膜撕裂，导致组织因子(Tissue factor，TF)暴露在血液中并启动外源性凝血机制，凝血酶原活化进而产生血栓，血栓阻断颈动脉血流导致缺血性脑卒中急性发作。目前，临床上广泛应用的他汀类药物虽然能够降低血脂、稳定血管内皮细胞、抗炎、缩小斑块，但由于他汀类药物具有肝毒性、横纹肌溶解等副作用，甚至部分人群对他汀类药存在过敏反应，导致一些患者无法坚持长期服用甚至无法使用他汀类药物，因此，寻找新的抗CAS药物具有非常重要的现实意义及临床价值。国内外最新研究表明:二甲双胍(Metformin，Met)具有降血糖、降血脂、稳定血管内皮细胞、减小斑块面积、改善人体内炎症微环境作用，二甲双胍也是被指南推荐为有明确的血管获益效果的降糖药物，但是目前国内关于二甲双胍对CAS斑块的研究较少，本研究对已经形成CAS斑块模型小鼠通过腹腔注射二甲双胍，探讨二甲双胍对CAS斑块的作用机制，为国内临床治疗CAS斑块提供实验依据。 方法： 本实验选取40只SPF级雄性健康敲除APOE基因小鼠，适应性喂养1周后，给予高脂饲料喂养，于第6周行右颈总动脉串联结扎手术，构造颈动脉串联狭窄模型，其中随机选取6只小鼠为假手术组，手术操作相同，不给予结扎。继续高脂喂养6周后，随机选出6只手术组小鼠和6只假手术组小鼠，对其右颈总动脉组织行HE及天狼星红染色，结果显示手术组小鼠颈动脉形成斑块，而假手术组小鼠未形成斑块，提示手术组小鼠造模成功。将造模成功的手术组小鼠随机分为2组:二甲双胍组(Met组)和生理盐水组（NS组）。Met组每只小鼠每天腹腔注射10mg/kg二甲双胍溶液，NS组每只小鼠根据体重注射同等体积的生理盐水作对照。继续喂养14天，分别于第0天、3天、7天、11天、14天测量2组小鼠的空腹体重。干预14天后，夜间禁食，于第二日早上8:00，从眶后静脉丛取血，测定空腹血糖、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平。完整取出小鼠右侧颈动脉组织制作石蜡切片，用HE染色在光镜下观察动脉斑块大小;用天狼星红对胶原纤维染色并在光学显微镜下观察;对切片行免疫组织化学染色检测斑块内TLR4、NF-κB及MMP-9蛋白表达情况。本次实验数据采用SPSS26.0软件行统计学分析，采用GraphPad Prism 8软件制图，计量资料结果采用平均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用两独立样本体检验分析，重复测量数据采用重复测量方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。 结果： (1)手术+高脂饮食干预12周后，手术组与假手术组小鼠颈动脉HE及天狼星红染色显示，手术组小鼠颈动脉形成明显的斑块，而假手术组未形成斑块。(2)Met组与NS组小鼠体重增长稳定，与NS组相比，Met组体重增长较缓，但体重变化无统计学差异（P＞0.05）。(3)与NS组相比，Met组空腹血糖略下降，但无统计学差异（P＞0.05）。(4) Met组与NS组比较，Met组小鼠血清中TG及LDL-C水平下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。(5)通过HE及天狼腥红染色显示，与NS组比较，Met组颈动脉斑块面积下降。(6)通过免疫组化检测斑块内TLR4、NF-κB及MMP-9蛋白表达水平，结果显示:与NS组相比，Met组TLR4、NF-κB及MMP-9蛋白表达均下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 1二甲双胍短期干预对CAS模型小鼠的空腹体重及空腹血糖不造成明显影响的情况下，降低了CAS模型小鼠血清中TG及LDL-C水平，改善血脂，减小CAS模型小鼠颈动脉管腔内粥样硬化斑块面积。 2.二甲双胍短期干预降低了CAS模型小鼠斑块内炎症蛋白TLR4、NF-κB的表达，降低了斑块组织的炎症水平，二甲双胍短期干预降低了动脉粥样斑块中MMP-9的表达，抑制斑块组织中纤维降解，可能增加了斑块稳定性。
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