摘要
目的：1.模拟人眼表碱烧伤建立小鼠眼表碱烧伤模型;2.评估眼表碱烧伤后角/结膜损伤情况及新生血管、纤维化的变化情况;3.探索焦亡是否参与眼表碱烧伤后角/结膜的损伤反应。 方法：第一部分:采用10ul lmol/LNaOH滴于小鼠眼表30s建立小鼠眼表碱烧伤模型，分别于第3天、5天、7天、14天、22天对小鼠进行角膜混浊情况评分、眼表染色评分、角膜新生血管评分。第二部分:分别于造模后第3天、5天、7天、14天、22天对小鼠进行角膜及结膜组织取材，采用实时荧光定量PCR技术检测碱烧伤后角/结膜组织新生血管相关指标VEGF、MMP-2、MMP-9和肌成纤维细胞的标志物α-SMA的mRNA水平， 同时采用Western Blot检测角/结膜组织新生血管相关指标VEGF、MMP-2、MMP-9和肌成纤维细胞的标志物α-SMA的蛋白表达，HE染色观察第7天、14天、22天小鼠眼表组织炎症浸润情况。第三部分:分别于造模后第3天、5天、7天、14天、22天对小鼠进行角/结膜组织取材，采用实时荧光定量PCR技术检测烧伤后角/结膜组织细胞焦亡相关指标NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA表达水平，同时采用Western Blot检测角/结膜组织细胞焦亡相关指标NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β的蛋白表达。 结果：1.碱烧伤后第14天小鼠角膜混浊程度最严重，之后角膜混浊程度减轻。眼表组织上皮缺损面积在5-7天达到最大，之后上皮逐渐愈合。小鼠角膜新生血管随着时间逐渐侵入角膜，伤后第14天角膜新生血管侵入角膜中央。 2.小鼠眼表碱烧伤后，眼表组织实时荧光定量PCR结果与WB结果均显示新生血管相关指标VEGF、MMP-2、MMP-9和纤维化相关指标α-SMA的mRNA及蛋白表达水平均明显增加。在结膜组织中，新生血管相关指标VEGF、MMP-2、MMP-9在第3-5天开始上升持续至第22天，纤维化相关指标α-SMA在第3天开始上升持续至第22天。角膜组织中，新生血管相关指标VEGF、MMP-2、MMP-9在第3-5天开始上升持续至第22天，纤维化相关指标α-SMA在第5-7天开始上升持续至第22天。 3.小鼠眼表组织碱烧伤后，眼表组织荧光定量PCR结果与WB结果均显示细胞焦亡相关指标NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA及蛋白表达水平较空白对照组明显增加。 结论：1.10ul 1 mol/LNaOH滴于小鼠眼表30s可模拟人眼表碱烧伤建立相对稳定可靠的小鼠眼表碱烧伤模型;2.细胞焦亡可能参与眼表碱烧伤后角/结膜的损伤反应。
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