摘要
目的:蝴蝶花Iris japonica Thunb.为鸢尾科鸢尾属多年生草本植物，在我国分布非常广泛，常用作民间草药及园林绿化植物，具有消肿止痛，清热解毒的功效。具有药用资源开发的广阔前景。目前蝴蝶花一直停留在民间用药，常常与药材射干和川射干混用，对其研究匮乏，因此，明确蝴蝶花的生药学特征，建立一种全面有效的质量评价体系，为保障其用药的安全有效和扩大寻找新药源具有重要意义。本实验从蝴蝶花的性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别等方面对蝴蝶花进行了初步的生药鉴别。利用DNA分子标记技术建立其分子鉴别方法及遗传多样性考察。利用蝴蝶花不同溶剂提取部位进行多个肿瘤细胞株的抗肿瘤活性筛选，为蝴蝶花药用资源的系统开发及抗肿瘤活性物质基础的研究提供了初步的理论和实验依据。方法:本文采用了来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定方法对蝴蝶花进行生药学初步研究。利用ISSR和SCoT分子标记技术对蝴蝶花及其近缘属物种进行分子鉴定及遗传多样性研究。同时，为考察蝴蝶花不同溶剂提取部位的抗肿瘤效果，本研究以不同极性的有机溶剂依次回流提取蝴蝶花总浸膏，得到五种不同的溶剂提取部位的样品，分别测定了五种溶剂提取部位对人肝癌细胞株HepG2，人宫颈癌细胞株Hela，人肺腺癌细胞A549，人结肠癌细胞株Hccc-9810，人大细胞肺癌细胞株H460的抑制效果，筛选出对肿瘤增殖抑制率较高的提取部位和较敏感的肿瘤细胞株，为蝴蝶花资源的进一步开发利用提供理论依据。 结果:1.蝴蝶花为鸢尾科鸢尾属植物蝴蝶花(Iris japonica.)，多年生草本，茎直立。其根茎药材呈现不规则条状，常弯曲，通常不分枝，但具有不规则纵向皱纹，节间明显，且呈环状凸起，上面残留有干枯的叶柄或叶柄残基。根茎横切面具有宽广的皮层，内皮层明显，中柱外有石细胞环带和纤维束，中柱中分布多数散在维管束。其根茎的粉末特征为:方形或长方形石细胞孔沟明显，多数非腺毛呈星状，导管多数，以网纹导管为主，纤维多数。理化实验发现蝴蝶花中含有黄酮、三萜类物质。以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(10-2-0.2)为展开剂，进行薄层鉴别，蝴蝶花根茎提取物分离度良好，鸢尾黄素和芹菜素对应位置斑点较明显。 2.对蝴蝶花及射干属和鸢尾属等近缘属物种共12份材料进行分子鉴别和遗传多样性研究，筛选出10条ISSR引物和SCoT引物，分别扩增出130和143条带，多态性条带百分率分别为96.2％和97.9％。12份材料间的Shannon多样性信息指数(I)分别为0.5402和0.5003; Nei''s基因多样度指数(H)分别为0.3630和0.3273，表明12份材料间遗传差异较大。基于SCoT标记分析获得的遗传距离高于ISSR标记分析获得的遗传距离。基于SCoT标记聚类分析表明，在相似系数高于0.74时蝴蝶花、射干、川射干均能独立成支，能较好地与鸢尾属其他材料进行区分。 3.体外抗肿瘤活性实验表明，蝴蝶花不同极性溶剂提取部位对人肝癌HepG2细胞株，人宫颈癌Hela细胞株，人肺腺癌A549细胞，人结肠癌Hccc-9810细胞，人大细胞肺癌H460细胞有不同程度的增殖抑制作用。其中乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有较好的抑制肿瘤增长的活性，且呈现出良好的剂量-量效关系，乙酸乙酯部位对HepG2细胞的增殖抑制作用最好，IC50为53.08 μg/mL，正丁醇部位对HepG2人肝癌细胞株抑制作用较强，其IC50为174.91 μg/mL，而石油醚和95％乙醇提取部位抑瘤效果不明显，表明蝴蝶花抗肿瘤活性有效成分主要集中在乙酸乙酯和正丁醇部位。 结论:本研究确定了蝴蝶花的基源，并详细描述了其显微及理化鉴别特征。ISSR和SCoT标记能稳定、快速、准确的应用于射干、川射干药材的分子鉴定。SCoT标记在研究鸢尾科植物种内居群的遗传多样性比ISSR标记更具优势。对蝴蝶花不同溶剂部位的体外抗肿瘤活性进行初步筛选，发现其乙酸乙酯部位和正丁醇部位表现出良好的活性，为进一步研究蝴蝶花抗肿瘤有效活性成分奠定了基础。为蝴蝶花资源的药用开发提供系统的理论依据。
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