摘要
目的：现代中医药是中华文化的结晶，中药复方制剂是中医药传承的重要形式。从中药中提取出了大量的活性物质，并且由此衍生出的中药纳米制剂也数不胜数。但鲜有对复方制剂中的中药纳米粒进行疗效验证及重构的研究。据此，本论文旨在探索中药复方制剂中可能存在的活性纳米成分及其对疾病的治疗功效。 方法：受自然界中常见自组装现象的启发，本论文利用差速离心法对12种中药复方合剂进行分析，将合剂分为上清、纳米粒和沉淀三部分；采用粒度分析仪、透射扫描电镜等对纳米颗粒的粒径和形貌进行了表征。为验证分离所得不同组分的药效学性能，我们选择其中一种合剂——清血除湿合剂作为对象，在体外细胞及银屑病动物模型中开展治疗实验。随后，采用核磁共振氢谱、高效液相色谱、蛋白浓度测定试剂盒及透射电镜元素能谱分析等方法对纳米粒的生物学信息及主要活性成分含量进行测定，并以甘草蛋白为载体对分离所得纳米组分进行初步重构，组装出成分简化的纳米粒（GP-NPs），最后通过小鼠银屑病模型验证该纳米粒的治疗效果。 结果：本研究首先通过梯度离心获取中药合剂内的不同组分，透射电镜和粒度仪测试的结果表明12种中药合剂中均存在纳米粒结构。在细胞水平上，相比于中药合剂本身，清血除湿纳米粒（QX-NPs）表现出更好的抗炎、促增殖以及抗氧化能力。在小鼠银屑病模型中，通过比较清血除湿合剂不同组分的治疗效果发现，清血除湿纳米粒显示出更好的治疗效果。基于此，我们利用高效液相色谱等方法分析出该纳米粒主要成分为蛋白质、黄芩苷、芍药苷和甘草苷。根据活性成分的比例对清血除湿纳米粒进行重构，成功得到甘草蛋白载药纳米粒（GP-NPs）。透射电镜表明该纳米粒大小均一，形态规整。同时，高效液相分析结果表明甘草蛋白载药纳米粒中各组成成分比例稳定，且接近于清血除湿纳米粒的物质构成。疗效分析结果显示：在细胞水平上，甘草蛋白载药纳米粒能够快速被肠上皮细胞及巨噬细胞摄取；在银屑病小鼠模型中的研究发现，甘草蛋白载药纳米粒和阳性对照药物甲氨蝶呤疗效相当。经甘草蛋白载药纳米粒治疗的小鼠银屑病症状明显缓解，鳞屑减少；病理组织切片显示治疗后小鼠的表皮层厚度变薄，棘突消失；炎症因子分析结果显示甘草蛋白载药纳米粒治疗能显著降低小鼠体内IL-17、IL-6和TNF-α水平，相关结果表明甘草蛋白载药纳米粒对银屑病具有良好的治疗效果。 结论：本研究结果表明，在12种中药合剂中均有纳米粒的存在，且清血除湿合剂中的纳米粒可能发挥了有效的生物活性。以清血除湿纳米粒为基础构建了一种制备简单、组分明确的纳米粒，对银屑病的治疗效果与阳性药物甲氨蝶呤相当。 创新点： 1、本论文从纳米组装的角度来研究中药复方合剂，结果表明在一些中药复方合剂中存在纳米粒；且在适应症的治疗中，纳米粒显示了良好的治疗效果，可能是其主要活性组分。 2、本论文在上述高活性纳米粒的基础上，通过对其成分进行分析，成功构建了一种成分简单且疗效明确的纳米制剂，对中药活性成分进行共递送，实现了纳米医学与中药的有机结合。
NETL