摘要
背景 结外NK/T细胞淋巴瘤（ENKTCL）恶性程度高，预后差，对人类的生命和健康造成了很大的危害，阐明其发生和发展的分子机制对于改善现有治疗模式和开发新型疗法至关重要。 目的 通过对临床及病理确诊的肿瘤性病变进行特征分析，并结合相关的基础医学实验手段，从而明确STAT3靶向调控FOXP1在结外NK/T细胞淋巴瘤发生发展中的作用，初步探索STAT3和FOXP1作为结外NK/T细胞淋巴瘤早期诊断标志物的可能性，为进一步研究STAT3和FOXP1在结外NK/T细胞淋巴瘤中的临床意义和分子机制奠定基础。 方法 回顾性分析2010年1月至2018年12月于聊城市人民医院确诊的50例ENKTCL患者，并且所有患者的肿瘤性病变均位于鼻腔内；进行各患者之间临床及病理特征的比较与分析，主要临床特点包括：年龄（Age）、性别（Gender）、B症状（Bsymptoms）的有无、血液中乳酸脱氢酶（LDH）的水平、临床分期（AnnArbor分期）和国际预后指数评价系统(IPI)等；收集与确诊患者相对应的50例石蜡组织病理切片，采用免疫组织化学实验分别检测切片中STAT3和FOXP1的蛋白质表达情况，病理结果由至少2位具备高级专业技术职称并且经验丰富的病理诊断医师共同确定；培养NK-92细胞（ENKTCL细胞系），使细胞处于快速增殖阶段，并且保证其能稳定传代，利用CCK-8试剂盒检测NK-92细胞的增殖情况，计算出增殖抑制率；采用处于对数生长期的细胞，利用蛋白质免疫印迹实验分别分析NK-92细胞中STAT3和FOXP1的蛋白质表达情况，进行灰度值分析来表征蛋白质的相对表达量；利用C188-9（特异性STAT3靶向抑制剂）处理NK-92细胞，使用流式细胞仪观察细胞凋亡情况，进行相关绘图分析；采集的统计学数据运用SPSS19.0软件进行分析，计量数据以?(x)±SEM表示，计数资料用χ2检验和t检验，采用Pearson检验进行相关性（包括正相关和负相关）的计算与分析，数据差异具备统计学意义的采纳标准：P＜0.05。 结果 50例ENKTCL组织标本中，STAT3阳性率为72%，FOXP1阳性率为54%；20例对照组织标本中，STAT3阳性率为40%，FOXP1阳性率为25%。ENKTCL中STAT3的表达阳性率高于对照组（χ2=6.266,P=0.012），FOXP1的表达阳性率高于对照组（χ2=4.841,P=0.028）。50例ENKTCL组织标本中，STAT3和FOXP1同时阳性的有23例，STAT3阳性、FOXP1阴性的有13例，STAT3阴性、FOXP1阳性的有4例，STAT3和FOXP1同时阴性的有10例，STAT3和FOXP1在ENKTCL组织中的表达呈现正相关（r=0.318,P=0.024）。STAT3的表达与患者的临床分期（AnnArbor分期）有关（P＜0.05），与年龄（Age）、性别（Gender）、B症状（Bsymptoms）的有无、血液中乳酸脱氢酶（LDH）的水平和国际预后指数评价系统(IPI)均无相关性（P＞0.05）；FOXP1的表达与患者的年龄（Age）、性别（Gender）、B症状（Bsymptoms）的有无、血液中乳酸脱氢酶（LDH）的水平、临床分期（AnnArbor分期）和国际预后指数评价系统（IPI）均无相关性（P＞0.05）。CCK-8实验显示C188-9处理过的NK-92细胞的增殖能力减弱，与对照组相比较，细胞增殖抑制率为（67.2±1.4）%，且差异具有统计学意义（P＜0.001）。蛋白质印迹实验显示C188-9处理过的NK-92细胞中STAT3和FOXP1的表达同时下降，与对照组相比较，STAT3和FOXP1的蛋白表达同时下调[(39.3±12.6)%、(67.3±9.7)%]，差异具有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞仪显示STAT3的活性下降可明显增加NK-92细胞的凋亡率，与对照组相比较，NK-92细胞的凋亡率显著上升[(27.9±0.96)%、(95.07±2.17)%]，差异具有统计学意义（P＜0.001）。 结论 STAT3和FOXP1在ENKTCL组织中高表达，STAT3通过正向调控FOXP1，从而促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡，STAT3和FOXP1之间的这种分子作用机制可以作为ENKTCL的潜在治疗靶点，并且STAT3的高表达提示患者预后较差。
NETL