摘要
目的研究下调冷诱导RNA结合蛋白（CIRBP）对人前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期、凋亡及小鼠皮下移植瘤等体外和体内表型的影响，使用RNA测序技术结合生物信息学分析，揭示下调CIRBP抑制人前列腺癌细胞生长的分子机制，为前列腺癌的靶向治疗提供研究思路和策略。 方法1、利用WesternBlot技术检测CIRBP在人正常前列腺上皮细胞系（NHPrE1）和人前列腺癌细胞系（PC3和LNCaP）中的表达情况；2、通过慢病毒感染的方法构建人前列腺癌细胞（PC3和LNCaP）的稳转细胞系，分为对照组（用EV病毒感染PC3和LNCaP，即PC3-EV和LNCaP-EV）和下调CIRBP组（用携带CIRBP-shRNA病毒感染PC3和LNCaP，即PC3-shCIRBP和LNCaP-shCIRBP）；3、利用CCK-8细胞增殖法、克隆形成实验和EdU增殖实验检测对照组和下调CIRBP组细胞的增殖能力；4、利用细胞划痕法和transwell小室实验检测对照组和下调CIRBP组细胞的迁移和侵袭能力；5、通过流式细胞术对对照组和下调CIRBP组细胞的细胞周期和细胞凋亡情况进行检测分析；6、用PC3-EV和PC3-shCIRBP建立小鼠皮下移植瘤模型，两组分别皮下注射1.5×106个细胞，每5天测量小鼠的肿瘤大小，40天后取出皮下移植瘤组织称重并拍照，绘制肿瘤生长曲线并进行肿瘤组织HE染色和免疫组化分析等；7、对PC3-EV和PC3-shCIRBP进行RNA-seq检测，筛选差异表达基因（p值≤0.05，foldchange≥2或≤0.5），并对差异基因进行GeneOntology（GO）和KEGGpathway分析，最后通过qRT-PCR对转录组结果进行验证；8、通过WesternBlot技术检测PTEN和AKT蛋白在对照组和下调CIRBP组细胞中的表达情况。 结果1、CIRBP在人前列腺癌细胞系（PC3和LNCaP）中的表达显著高于人正常前列腺上皮细胞系（NHPrE1）；2、下调CIRBP表达可显著抑制人前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭，并促进细胞凋亡，同时将细胞周期阻滞在S期；3、下调CIRBP表达可显著抑制小鼠的体内成瘤性；4、RNA-seq结果显示，下调CIRBP表达后共引起1011个基因的表达发生改变，通过对差异基因的功能分析并结合已有的文献报道，我们发现PTEN/AKT信号通路可能是CIRBP调控前列腺癌的核心通路，且WesternBlot结果显示，下调CIRBP表达后，PTEN蛋白的表达增加，而p-AKT蛋白的表达减少。 结论1、与人正常前列腺上皮细胞相比，CIRBP在人前列腺癌细胞中的表达水平是显著增高的；2、下调CIRBP可同时显著抑制人前列腺癌细胞在体外的生长和体内成瘤性；3、CIRBP通过调控PTEN/AKT信号通路影响前列腺癌细胞的生长。
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