摘要
番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)、番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)及其伴随卫星DNA(Betasatellite DNA)是三种经常复合侵染番茄的病毒,其中番茄褪绿病毒可单独侵染番茄并引发病症,也经常与双生病毒混合侵染茄科植物,伴随卫星 DNA则通常伴随双生病毒加快其发病速度或引发特定症状,番茄黄化曲叶病毒是影响番茄产量最重要的病毒之一,ToCV 、TYLCV 及其伴随卫星DNA对河北省番茄生产有重大影响。 本研究从河北省石家庄市大河采集出现卷曲窄小、皱缩、黄化等症状的番茄叶片并对其进行病毒检测,检测结果显示感染有番茄褪绿病毒、番茄黄化曲叶病毒及其伴随卫星 DNA。对番茄褪绿病毒石家庄分离物、番茄黄化曲叶病毒石家庄分离物及其伴随卫星 DNA 石家庄分离物进行序列分析,并在 Genbank 上选取国内外有代表性的TYLCV序列、伴随卫星DNA序列及ToCV序列进行比对构建系统进化树。发现番茄褪绿病毒最有可能从邯郸传播而来,番茄黄化曲叶病毒与山东潍坊报道的分离物相似度最高,番茄黄化曲叶病毒碱基序列发生较多变异,伴随卫星DNA则可能来源于河南。 根据ToCV 、TYLCV及其伴随卫星DNA的序列设计引物建立三者的多重PCR检测体系,该体系中番茄黄化曲叶病毒、伴随卫星 DNA 的检测体系最低检出浓度为1ng/mL,番茄褪绿病毒最低检出浓度为 1ug/mL。使用该检测技术对石家庄地区采集到的29个番茄样本进行检测,部分样品只检测到TYLCV病毒,部分样品只检测到ToCV病毒,少数样品只检测到伴随卫星 DNA,其中 6 个样品检测到 TYLCV 和伴随卫星DNA 两类病毒,4 个样品检测到 TYLCV 和 ToCV 两累病毒,两个样品检测到全部ToCV 、TYLCV及其伴随卫星DNA,确认了该检测方法的可靠性。 利用TYLCV侵染性克隆,对八个番茄品种进行番茄黄化曲叶病毒病抗性试验,发现其中 1420、1422有较好的番茄黄化曲叶病毒病抗性,其余品种番茄黄化曲叶病毒病抗性一般或抗性较差。同时构建了伴随卫星 DNA 的侵染性克隆并发现其可加强TYLCV侵染性克隆的致病性。 本研究明确了番茄褪绿病毒、番茄黄化曲叶病毒及其伴随卫星 DNA的来源为科学防控提供技术手段和科学依据,建立起 ToCV 、TYLCV及其伴随卫星 DNA的快速检测体系使 ToCV 、TYLCV及其伴随卫星 DNA的检测更为便捷成本更低,构建番茄黄化曲叶病毒伴随卫星DNA的侵染性克隆为番茄的种子资源筛选及抗病品种培育提供技术支持。