摘要
A型流感病毒（InfluenzaAvirus，IAV）是一种重要的人畜共患病毒。由IAV引发的季节性流感和偶发的大流行不仅严重威胁着人畜健康，也造成了巨大的经济损失。与大多数病毒一样，IAV具有相对较小的基因组和有限的编码蛋白能力，需依赖宿主机制完成生命周期。因此，寻找参与流感病毒复制的宿主因子并阐明其调控机制成为解析病毒致病机理的重要手段之一。 实验室前期研究表明含锚蛋白重复和BTB域蛋白1（AnkyrinrepeatandBTBdomaincontaining1，ABTB1）正调控流感病毒复制，但其调控机制尚不清楚。本研究通过Co-IP联合质谱技术筛选与ABTB1互作的宿主蛋白，以期通过互作蛋白解释ABTB1调控流感病毒复制的机制。本研究选取质谱结果中得分较高的真核翻译延伸因子1α1（Eukaryotictranslationelongationfactor1alpha1，eEF1A1）进行深入研究。首先，利用外源转染eEF1A1表达质粒或siRNA分别上调或下调eEF1A1表达，经噬斑滴定、RT-qPCR及WesternBlot验证eEF1A1对流感病毒复制的影响。结果显示，上调表达eEF1A1能够显著抑制流感病毒复制，下调表达eEF1A1则显著促进流感病毒复制。接下来，本研究探索了eEF1A1对病毒复制阶段的影响，发现下调表达eEF1A1不影响流感病毒的吸附、内吞、膜融合及脱衣壳过程，但显著增强病毒vRNP复合体入核及其活性。Co-IP结果显示，eEF1A1与核输入蛋白importinα5互作，但不会影响importinα5在细胞中的稳定表达，也不会与NP蛋白竞争性地结合importinα5，eEF1A1影响vRNP复合体入核的具体分子机制待进一步阐明。通过深入研究ABTB1与eEF1A1之间的关系，本研究发现ABTB1能够降解eEF1A1，其BTB2结构域是与eEF1A1互作并发挥降解作用的关键结构域。ABTB1通过与CUL3形成CUL3-BTBE3泛素连接酶复合体促进eEF1A1泛素化，泛素化的eEF1A1被自噬受体OPTN识别并结合，进而介导对eEF1A1的选择性自噬降解。最后，本研究通过噬斑滴定实验和WesternBlot证实了过表达ABTB1能够拮抗eEF1A1负调控流感病毒复制的能力。 综上所述，本研究证实了eEF1A1抑制流感病毒复制，主要是影响流感病毒入核阶段与聚合酶活性，具体的机制待进一步阐明。与此同时，本研究还证实了ABTB1能够通过自噬受体OPTN介导选择性自噬降解eEF1A1，进而拮抗eEF1A1负调控流感病毒复制的能力。本研究丰富了流感病毒与宿主间的互作网络，为流感病毒防控提供了新思路。
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