磷脂酶是指能特异性水解磷脂的酶的统称，磷脂酶根据作用于底物的位置不同可以分为磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶B、磷脂酶C、磷脂酶D。磷脂酶及其衍生物在医药，油脂精炼，磷脂改性，食品加工等领域具有广泛用途。因此，筛选优良性能的磷脂酶，成为了人们关注的焦点。为此本研究选用微生物类型丰富的海泥作为样本，筛选产磷脂酶菌株，并对其进行鉴定、生长条件研究、发酵条件优化及酶学性质研究。 海洋假交替单胞菌（Pseudoalteromonassp.）HL9的筛选鉴定：富集培养后，经多轮筛选，共得11株菌，选择透明圈最大的菌株HL9。菌株HL9在分离培养基上菌落形态为：呈圆形，表面光滑，边缘整齐，呈乳白色，菌落周围出现较大的透明晕圈。经细胞染色及扫描电镜鉴定，菌株HL9为革兰氏阴性菌，无荚膜，无芽孢，无鞭毛的短杆菌。菌株生理生化特征为：不利用大部分糖醇，精氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、氧化酶、亚硝酸盐产气、苯丙氨酸呈阳性，属于发酵型菌株。通过邻接法（Neibor-joingmethod）构建系统发育树，菌株HL9与假交替单胞菌属（Pseudoalteromonassp.）NR126232.1亲缘关系最近，相似度达99%。 假交替单胞菌HL9的生长条件研究：通过碳源、氮源、温度、pH、NaCl浓度等条件对菌株生长进行优化。实验结果表明，该菌株最佳生长培养基组成为米糠与酵母粉，最佳生长pH为8.0、NaCl浓度为30g/L、温度为25℃。且菌株在pH6～9、温度20～40℃、NaCl浓度5～100g/L等范围内时，生长良好。这说明，菌株HL9各方面耐受性良好。 假交替单胞菌HL9产磷脂酶B发酵条件优化：单因素优化菌株发酵产酶条件，结果表明，菌株最佳发酵培养基组成为：10g/L麸皮、5g/L鱼粉蛋白胨、pH8.0、NaCl20g/L，最佳发酵培养条件：25℃摇床培养、接种量2%、发酵48h。正交试验结果表明，四个因素对产酶影响不显著（Pgt;0.05），发酵培养基最优组合为A2B1C3D3即是10g/L麸皮，5g/L鱼粉蛋白胨，pH8.5，培养温度为30℃。四因素的影响均为不显著，表明该菌在发酵产酶中适应性较好。优化后的发酵液磷脂酶活力达到了1200U/L，且发酵液中无脂肪酶活性。 假交替单胞菌HL9产磷脂酶B酶学性质研究：由TLC结果可见，水解产物中存在溶血磷脂和脂肪酸，这说明，该酶水解了底物的sn-1酯键或sn-2酯键。但尚难以判断水解的是sn-1酯键还是sn-2酯键。运用气相色谱进行定性分析，结果表明，该磷脂酶可以同时水解sn-1酯键和sn-2酯键，筛选的磷脂酶为磷脂酶B。另该酶的最适反应温度和pH分别为45℃和7.5。且在30～50℃、pH为7～8之间时，酶活性较稳定。Si2+、Ca2+、Co2+、Mn2+、Zn2+、Ba2+等金属离子对酶活性有促进作用，经显著性分析，Si2+离子对酶活性促进作用最高，相对酶活力达到113.94%，添加Cu2+、Ni2+、Mg2+、Fe3+、K+对酶的活性有轻微的抑制作用，经显著性分析，Cu2+离子对酶的活性有较大的抑制作用，相对酶活力仅剩67.06%。该酶对有机溶剂耐受性好，其中添加乙二醇、甲醇、异丙醇、吐温80等有机溶剂的相对酶活力均能保持90%以上，其余的也都保持在80%以上。该酶乙二醇耐受性强于甘油耐受性，两者具有显著性差异。反应温度高和碱性条件等催化特性使该酶具有较好应用前景，研究结果也为进一步探索该酶的结构与功能奠定了基础。
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