摘要
泥鳅鳃出血病是泥鳅养殖过程中易发疾病，本研究从泥鳅病灶部位分离到优势病原菌JY5、1CT2、2GP。以病原菌JY5、1CT2和2GP为指示菌，从健康泥鳅养殖池底泥和健康泥鳅肝胰脏中分离到拮抗菌CJT23和G7-6。通过菌落形态、生理生化鉴定及构建系统进化树，初步判断JY5和1CT2均为维氏气单胞菌，2GP为普通变形杆菌，CJT23和G7-6分别为边缘假单胞菌和贝莱斯芽孢杆菌。 本研究主要以病原菌维氏气单胞菌JY5为指示菌，及其拮抗菌边缘假单胞菌CJT23进行研究。边缘假单胞菌CJT23生长曲线结果表明，发酵0-16h时处于生长对数期，16-32h处于稳定期，32h后到衰亡期，但32h时抑菌活性最强，达（21.2±0.29）mm。药敏试验结果表名，该菌对庆大霉素、链霉素和复方新诺明3种药物表现出敏感及中敏，提示在使用边缘假单胞菌CJT23防治泥鳅鳃出血病时应避免使用上述敏感及中敏抗生素。其传代稳定性表明，第3代和第5代到第10代无显著性差异（Pgt;0.05），能够稳定传代。拮抗谱试验结果显示，CJT23对病原菌JY5、副溶血弧菌、鳗弧菌、创伤弧菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和哈维氏弧菌表现出不同程度的抑菌性，其抑菌圈直径分别为（21.00±0.41）mm、（17.97±0.21）mm、（15.93±0.26）mm、（12.73±0.26）mm、（12.63±0.17）mm、（12.57±0.12）mm和（11.47±0.17）mm，而对豚鼠气单胞菌无抑菌效果。 以抑菌圈直径为指标对拮抗菌边缘假单胞菌CJT23进行条件优化，单因素条件优化结果表明装液量为50%、接种量为1%（V/V）、盐度为1%、pH为7、转速为130r/min、温度为20℃，碳源为葡萄糖、氮源为胰蛋白胨、无机盐为氯化钙、生长因子为半胱氨酸时，抑菌圈直径最大。正交试验结果表明，影响因素为碳源gt;无机盐gt;氮源gt;生长因子，即酵母gt;氯化钠gt;胰蛋白胨gt;酪氨酸，发酵时间gt;盐度gt;pH，即发酵12h、pH为6、盐度为3%，抑菌圈直径最大。 通过对边缘假单胞菌CJT23活性物质的研究，初步判断其活性物质为抗菌蛋白，通过不同发酵时间、不同离心速度离心，均表明活性物质属胞内产物；选用Tris-HCl缓冲为最适缓冲液；对菌体进行超声波破碎，且缓冲液中Na+浓度对助溶均无显著性影响（Pgt;0.05）；当缓冲液pH为4、6、7时，其细胞破碎液与菌体重悬液有显著性差异（Plt;0.05）；用不同的洗液清洗菌体，表明活性物质并不在细胞膜表面；用20%乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂浸泡有活性的菌体，结果显示上述有机溶剂不仅不能提取活性物质，还是活性物质失活；用含有5%的DMSO的缓冲液对菌体进行细胞破碎，其上清有抑菌活性；用超滤管对含有活性物质的上清液进行浓缩，结果表明其分子量大于100kDa，且在4℃条件下比在其他温度下储藏时抑菌活性最强；通过对含有活性物质的上清液进行硫酸铵分级沉淀法分离，结果显示当硫酸铵初始饱和度为60%，终饱和度为80%时，其活性物质的抑菌活性最强。 本研究为泥鳅鳃出血病的快速防治提供了指导性意见，帮助泥鳅养殖户解决了燃眉之急，并进一步为该病害的生物防治提供了基础材料和理论依据，为泥鳅养殖业的可持续性养殖和生态环境的保护奠定了基础。
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