摘要
犬细小病毒(CPV)及猫细小病毒(FPV)是目前严重危害犬猫的传染病病原，具有发病率及病死率高的特点。CPV及FPV已在全球范围内广泛传播，由于病毒基因突变及基因重组速率较快，目前已发现有6种基因型毒株流行(CPV-2/2a/2b/2c及newCPV-2a/2b)，且病毒的宿主范围呈现不断扩大的趋势。目前针对VP2基因的研究较为成熟，但关于NS1基因的研究较少，然而NS1基因在病毒的复制、DNA组装、细胞毒力及致病性方面发挥重要作用。本研究于2019至2021年共收集到84份CPV及FPV阳性病料，并对其VP2及NS1基因氨基酸序列进行遗传进化分析。结果表明，CPV-2c是中国北部地区的主要流行基因型。发现VP2基因中13个可用于区分CPV及FPV的差异性氨基酸突变位点。同时由感染猫体内获得1株newCPV-2b及2株CPV-2c毒株，再次印证了CPV毒株能够同时感染犬及猫的研究观点。发现NS1基因中存在的多个重要氨基酸突变位点，同时针对细小病毒的结构蛋白及非结构蛋白基因进行遗传进化分析有助于研究其在不同宿主间传播的流行病学规律。 犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒是两种对我国犬科动物、毛皮动物及野生动物危害性较大的病毒性传染病病原。目前主要以疫苗免疫预防作为主要防控手段。伴随着新型基因工程技术高速发展以及抗原表位序列的不断验证，为研制多表位疫苗提供了理论基础和技术支撑。多表位疫苗无需操作活毒，可直接在基因水平上筛选抗原表位序列，安全性高，操作简便，适合大规模生产。本研究对CDV的N、F、H基因及CPV的VP1、VP2基因进行抗原表位预测，最终选择了N蛋白的2个B细胞表位；F蛋白的2个T细胞表位及2个B表位；H蛋白的2个B细胞表位；VP1蛋白的1个T细胞表位；VP2蛋白的3个B细胞表位用于构建重组多表位序列HRE01、HRE02及HRE03。为提高重组蛋白的表达水平及免疫原性，融合表达肝素结合血凝素蛋白(HBHA)作为分子内佐剂。WB结果鉴定3个重组蛋白均具有良好的反应原性。间接ELISA方法结果表明在首免后14dCPV及CDV特异性抗体水平开始升高，在42d达到最高。HRE03组CPV特异性抗体水平最高，弱毒疫苗组CDV特异性抗体水平最高。血清中和试验结果表明HRE01、HRE02、HRE03及弱毒疫苗组CPV中和抗体效价分别为1∶18.6、1∶32、1∶32及1∶48。而3个重组蛋白组产生的CDV中和抗体效价较低，弱毒疫苗组CDV中和抗体滴度为1:45。在CCK-8淋巴细胞增殖实验中，各重组蛋白组及弱毒疫苗组刺激指数(SI)均明显高于阴性对照组，其中HRE03组最高，能够诱导产生IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10细胞因子。 本研究为我国犬猫细小病毒流行病学调查提供帮助，同时填补了NS1基因数据库短缺的问题，未来仍将持续对FPV及CPV进行流行病学监控，并对感染猫的CPV毒株进行深入研究。该研究构建的犬瘟热-细小病毒二联多表位抗原为多表位疫苗研究奠定基础，同时为该类疫苗研发应用的深入研究及进一步完善提供参考。
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