摘要
目的：高胆固醇血症是一种常见的代谢性疾病，是动脉粥样硬化、冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的主要诱因。三黄泻心汤作为中国传统复方制剂，具有清热解毒、泻火通便、燥湿泄热之功效。现代药理学研究表明，三黄泻心汤具有抗炎降脂的作用。本研究旨在探索复方三黄泻心汤治疗高胆固醇血症的效应物质和作用机制，为三黄泻心汤治疗高胆固醇血症的临床应用提供新的实验依据。 方法：首先构造细胞和动物模型，明确三黄泻心汤治疗高胆固醇血症的药效作用。继而采用UHPLC-Q-Orbitrap/MS联合mzCloud、Masslist、Chemspider和自建数据库对三黄泻心汤方剂中的物质组进行全面表征。据此构建成分-疾病-靶点网络，通过蛋白-蛋白相互作用网络分析、靶点-通路网络分析等，推断三黄泻心汤的关键活性成分、重要靶点以及作用通路。进而基于UHPLC-Q-Orbitrap/MS进行代谢组学研究，确定相关代谢通路。综合分析网络药理学和代谢组学结果，将共有途径作为三黄泻心汤治疗高胆固醇血症的主要干预通路，对筛选的关键活性成分及相应靶点进行分子对接验证，并对活性成分的药代动力学进行研究。 结果：三黄泻心汤能显著降低脂质积聚的HepG2细胞的TC、LDL-c、TG水平，改善HDL-c水平，改善高胆固醇血症小鼠体内TC、LDL-c、TG水平。基于UHPLC-Q-Orbitrap/MS分析，共从三黄泻心汤中鉴定184种成分，主要包括黄酮类、生物碱类、蒽醌类、酚类、糖苷类、苯丙素类等。血浆中检测到19种原型成分，其中黄酮类成分9种，蒽醌类成分4种，生物碱类成分5种，有机酸类成分1种，另有8个代谢产物。网络药理学分析得出主要活性成分有大黄素、芦荟大黄素、汉黄芩素、小檗碱、药根碱等，涉及JUN、SRC、AKT1、TNF等20个关键靶点，及肿瘤坏死因子、P13K-Akt、鞘脂代谢通路、白细胞介素-17等相关信号通路等46个。代谢组学研究表明三黄泻心汤可能通过回调鞘氨醇、神经酰胺水平影响鞘脂代谢途径，通过回调精氨酸、反式-4-羟基-D-脯氨酸水平影响精氨酸和脯氨酸代谢和精氨酸生物合成，通过回调5-羟基吲哚-3-乙酸、犬尿氨酸水平影响色胺酸代谢，通过回调胆碱水平影响醚脂代谢和甘油磷脂代谢改善高胆固醇血症。整合网络药理学和代谢组学分析结果，提示三黄泻心汤中有效成分汉黄芩素作用于AKT1,芦荟大黄素、大黄素、汉黄芩素作用于TNF及TP53，药根碱、小檗碱可能作用于eNOS影响鞘脂代谢通路，从而降低胆固醇水平。分子对接结果表明活性成分与关键靶点的亲和力良好。大黄素、芦荟大黄素、汉黄芩素、药根碱、小檗碱在高胆固醇血症大鼠中的半衰期明显推迟，达峰时间也有所差别。芦荟大黄素、汉黄芩素、小檗碱、药根碱在高胆固醇血症大鼠中的生物利用度比正常大鼠中更高，为我们探讨三黄泻心汤治疗高胆固醇血症的药效物质提供更进一步的参考。 结论：本论文基于UHPLC-Q-Orbitrap/MS对三黄泻心汤中的化学成分进行了体内外全面表征，并以此为基础进行网络药理学分析，结合代谢组学研究发现三黄泻心汤中的活性成分汉黄芩素可能作用于AKT1,芦荟大黄素、大黄素、汉黄芩素可能作用于TNF、TP53，药根碱、小檗碱可能作用于eNOS影响鞘脂代谢，达到治疗高胆固醇血症的作用。本论文系统的阐述了三黄泻心汤治疗高胆固醇血症的效应物质和作用机制，为三黄泻心汤的临床应用提供参考。
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