摘要
目的研究西达本胺对弥漫大B细胞淋巴瘤（DiffuselargeB-celllymphoma，DLBCL）U2932（ABC亚型）和SUDHL-4（GCB亚型）细胞增殖及凋亡的影响，探讨西达本胺作用于ABC、GCB亚型DLBCL的可能机制，比较西达本胺对ABC、GCB亚型的疗效和作用机制有无差异。 方法 1.CCK8法检测西达本胺对U2932、SUDHL-4细胞活力的影响。 2.流式细胞术检测西达本胺对U2932、SUDHL-4细胞凋亡的影响。 3.用终浓度4umol/l西达本胺处理U2932细胞和SUDHL-4细胞，收集U2932和SUDHL-4细胞西达本胺处理组和对照组样本，进行3次生物学重复，提取收集的12例样本进行mRNA测序。分别将U2932、SUDHL-4细胞西达本胺处理组和对照组mRNA测序结果进行差异分析、GO、KEGG、GSEA富集分析，探究西达本胺在DLBCL中可能的作用机制。 4.利用cytoscape分别分析U2932、SUDHL-4细胞西达本胺处理组和对照组差异基因的蛋白相互作用关系，找出其关键子网络和关键基因，并用关键基因预测西达本胺的作用效果。 5.找出U2932和SUDHL-4细胞共同差异基因，对相同差异基因进行相关性分析。 结果 1.不同浓度西达本胺（30umol/l、15umol/l、7.5umol/l、3.75umol/l、1.875umol/l）处理U2932细胞24h增殖抑制率由（74.30±5.81）%降至（37.86±5.86）%，差异具有统计学意义（P＜0.001）。处理U2932细胞48h增殖抑制由（91.50±1.11）%降至（37.16±2.43）%，差异具有统计学意义（P＜0.001）。西达本胺处理U2932细胞24hIC50为（3.74±0.03）umol/l，48hIC50为（2.55±0.17）umol/l，差异具有统计学意义（P＜0.01）。 2.不同浓度西达本胺（30umol/l、15umol/l、7.5umol/l、3.75umol/l、1.875umol/l）处理SUDHL-4细胞24h增殖抑制率由（76.35±1.07）%降至（30.75±1.08）%，差异具有统计学意义（P＜0.001）。处理SUDHL-4细胞48h增殖抑制率由（90.32±1.25）%降至（32.05±2.76）%，差异具有统计学意义（P＜0.001）。西达本胺处理SUDHL-4细胞24hIC50为（5.44±0.11）umol/l，48hIC50为（3.87±0.30）umol/l，差异具有统计学意义（P＜0.001）。 3.U2932细胞对比SUDHL-4细胞，西达本胺24小时IC50差异显著（P＜0.001），西达本胺48小时IC50差异显著（P＜0.01）。 4.不同浓度西达本胺（0umol/l、1.1umol/l、3.3umol/l、10umol/l、30umol/l）处理U2932细胞48h凋亡率由（6.31±0.81）%升至（42.60±2.22）%，差异具有统计学意义（P＜0.05），处理SUDHL-4细胞48h凋亡率由（8.27±0.76）%升至（65.13±9.24）%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 5.U2932细胞西达本胺处理组比对照组发现1255个上调基因，6个下调基因，GSEA富集以肿瘤相关通路基因集为参考时，PI3K-AKT信号通路显著富集。SUDHL-4细胞西达本胺处理组比对照组发现1686个上调基因，656个下调基因，GSEA富集以肿瘤相关通路基因集为参考时，PI3K-AKT信号通路显著富集。 6.U2932细胞发现10个西达本胺处理相关的蛋白相互作用关键基因ALB、FN1、SRC、CXCL8、FGF2、PTK2、PECAM1、BDNF、JUN、CXCL10。SUDHL-4细胞发现10个西达本胺处理相关的蛋白相互作用关键基因TP53、FN1、BRCA1、CCND1、CDC6、CDK2、MCM2、PCNA、MCM7、JUN。U2932细胞关键节点基因FN1、PTK2、JUN的高表达可能预示着DLBCL对西达本胺有抗性。SUDHL-4细胞关键节点基因FN1、CCND1、JUN的高表达可能预示着DLBCL对西达本胺有抗性，BRCA1、MCM2、MCM7的高表达可能预示着DLBCL对西达本胺敏感。 7.U2932细胞中BCL2、MYC基因在西达本胺处理组与对照组中表达差异均不显著(BCL2P＞0.05,MYCP＞0.05)。SUDHL-4细胞中BCL2、MYC基因在西达本胺处理组与对照组中表达差异均不显著(BCL2P＞0.05,MYCP＞0.05)。 8.对比U2932和SUDHL-4细胞西达本胺处理组和对照组差异基因，发现402个相同基因，但相关性分析发现这些基因log2FC相关性较弱。 结论： 1.西达本胺对ABC亚型(U2932)、GCB亚型(SUDHL-4)DLBCL细胞具有增殖抑制作用，且作用呈时间和浓度依赖性。西达本胺对ABC亚型(U2932)的增殖抑制作用优于GCB亚型(SUDHL-4)细胞系。 2.西达本胺对ABC亚型(U2932)、GCB亚型(SUDHL-4)DLBCL具有凋亡促进作用，且促凋亡作用呈时间和浓度依赖性。 3.西达本胺可能通过影响PI3K-AKT通路对DLBCL细胞起抗肿瘤作用。 4.ABC亚型关键节点基因FN1、PTK2、JUN的高表达可能预示着DLBCL对西达本胺有抗性。GCB亚型关键节点基因FN1、CCND1、JUN的高表达可能预示着DLBCL对西达本胺有抗性，BRCA1、MCM2、MCM7的高表达可能预示着DLBCL对西达本胺敏感。 5.ABC、GCB亚型中西达本胺处理后BCL2、MYC表达量都未发生明显变化。
NETL