摘要
第一部分Foxp3+调节性T细胞转录因子Foxp3与Th17细胞相关因子IL-17A在子宫内膜的表达及意义 目的:本研究旨在通过观察Foxp3+调节性T细胞转录因子Foxp3与Th17相关细胞因子IL-17A在胚胎反复种植失败患者子宫内膜组织中的表达情况，初步探讨Th17细胞及Treg细胞与RIF疾病的关系。 方法:共纳入53名研究对象，其中反复种植失败患者26例，对照组27例。于胚胎种植窗即黄体中期（LH+6-7天）采集子宫内膜组织，采用免疫组化技术检测Foxp3和IL-17A在子宫内膜组织中的表达差异。 结果:子宫内膜组织中Foxp3的表达在反复种植失败组明显低于对照组(51.0±17.6％vs65.6±16.7％，P＜0.05)，IL-17A的表达在反复种植失败组明显高于对照组(57.7±18.4％vs48.9±12.8％，P＜0.05)。 结论:反复种植失败患者黄体中期子宫内膜组织Foxp3表达较对照组降低，IL-17A表达较对照组升高，提示反复种植失败患者种植窗期胚胎种植环境可能存在Th17/Treg细胞失衡，二者的失衡可能影响子宫内膜容受性，这也许是反复种植失败原因之一。 第二部分Th17/Treg平衡及相关细胞因子在正常生育人群与反复种植失败患者的表达及意义 目的:本研究旨在探讨反复种植失败患者外周血是否存在Th17/Treg失衡，以间接评估种植期子宫内膜的免疫调节环境。 方法:流式细胞计数检测反复种植失败患者(n=25)和正常生育未孕妇女(n=27)增殖晚期外周血单核淋巴细胞Th17和Foxp3+Treg占CD4+T细胞比例，并分析Th17/Treg比值在两组的差异以及Th17与Treg的相关性。同时，ELISA检测外周血中与Th17及Treg相关细胞因子(IL-10、TGF-β1、IL-6、IL-17A、IL-23)的分泌水平，比较Treg/Th17细胞因子比值的差异。qRT-PCR检测外周血Treg细胞与Th17细胞对应转录因子Foxp3与RORγtmRNA的相对表达量。 结果:反复种植失败组增殖晚期外周血单核淋巴细胞Th17占CD4+T细胞比例明显高于对照组(1.50±0.38％vs1.16±0.48％，P＜0.05)，而Foxp3+Treg占CD4+T细胞比例明显低于对照组(2.43±0.97％vs3.24±0.82％，P＜0.05)。反复种植失败组Th17/Treg比值明显高于对照组（中位数0.58vs0.34，P＜0.05）。Th17细胞比例与Treg细胞比例在反复种植失败组(r=-0.414，P＜0.05)和对照组（r=-0.397，P＜0.05）均提示存在负相关。反复种植失败组血清TGF-β1和IL-10水平明显低于对照组(0.26±0.20vs0.63±0.24;25.30±1.74vs26.72±2.68，P均＜0.05)，而IL-6，IL-17A和IL-23水平在反复种植失败组明显高于对照组（13.64±9.17vs8.77±3.26;中位数23.83vs20.21;中位数7.98vs7.79，P均＜0.05）。反复种植失败组Treg/Th17相关因子比值明显低于对照组（P均＜0.05）。反复种植失败组Foxp3mRNA表达与对照组相比，差异有统计学意义（0.87±0.54vs1.27±0.73，P＜0.05），而RORγtmRNA表达与对照组相比，差异也有统计学意义(1.53±0.74vs1.15±0.50，P＜0.05)。 结论:Treg细胞及相关细胞因子在反复种植失败患者外周血表达降低并伴有活性减弱，而Th17细胞及相关细胞因子反之表达增高及活性增强，提示Th17/Treg平衡在反复种植失败患者中出现Th17偏移，Th17/Treg失衡可能是反复种植失败的发病机制之一。逆转二者失衡可能是反复种植失败治疗的新方向。 第三部分强的松对反复种植失败患者Th17/Treg失衡的影响及意义 目的:研究旨在探讨糖皮质激素治疗能否扭转反复种植失败患者的Th17/Treg失衡以及对胚胎种植妊娠结局的影响。 方法:选取19例反复种植失败患者，流式细胞计数分别检测强的松治疗前后增殖晚期外周血单核淋巴细胞中Th17和Foxp3+Treg占CD4+T细胞比例及Th17/Treg比值的变化。同时，ELISA检测外周血与Th17/Treg相关细胞因子（IL-10、TGF-β1、IL-6、IL-17A、IL-23）的分泌水平以及治疗后对Treg/Th17细胞因子比值的影响。qRT-PCR检测外周血Treg细胞与Th17细胞对应转录因子Foxp3与RORγtmRNA的相对表达量。 结果:强的松治疗后的反复种植失败患者增殖晚期外周血单核淋巴细胞Th17占CD4+T细胞比例较治疗前明显降低（中位数1.18％vs1.39％，P＜0.05），而Foxp3+Treg占CD4+T细胞比例较治疗前明显升高(中位数2.88％vs2.36％，P＜0.05)。治疗后Th17/Treg比值明显下降(中位数0.54vs0.42，P＜0.05)。治疗后患者的血清TGF-β1和IL-10水平与治疗前相比明显升高（中位数0.53vs0.09;中位数26.24vs26.09，P均＜0.05），而IL-6，IL-17A和IL-23水平在治疗后较治疗前降低（中位数7.38vs12.59;中位数23.11vs24.94;中位数7.75vs7.93，P均＜0.05）。治疗后Treg/Th17相关因子比值明显升高（P均＜0.05）。治疗后Foxp3mRNA表达与治疗前相比，差异有统计学意义（中位数0.85vs0.54，P＜0.05），而RORγtmRNA表达与治疗前相比，差异也有统计学意义（中位数0.83vs1.60，P＜0.05）。治疗后RIF组再次胚胎移植的临床妊娠率为26.3％(5/19)。 结论:强的松治疗能逆转反复种植失败患者的Th17/Treg失衡，外周血单核淋巴细胞Foxp3+Treg细胞比例的增加可能有利于改善妊娠结局。
NETL