摘要
目的：探究载脂蛋白E(apoE)对氧糖剥夺下星形胶质细胞的影响及相关机制。 方法：体外培养C57BL/6J小鼠背景下的野生型(wt)和apoE基因敲除型(apoE-/-)星形胶质细胞。用抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗体鉴定星形胶质细胞纯度。CCK-8法测定星形胶质细胞氧糖剥夺（OGD）时长。将wt和apoE-/-的星形胶质细胞分别分为wt对照组、wtOGD4h组、apoE-/-对照组、apoE-/-OGD4h组。对照组无干预，OGD4h组星形胶质细胞在无糖无血清培养基及缺氧小室里培养4h。用流式细胞术测定wt对照组、wtOGD4h组、apoE-/-对照组、apoE-/-OGD4h组星形胶质细胞的凋亡。用实时荧光定量PCR法检测wt对照组、wtOGD4h组、apoE-/-对照组、apoE-/-OGD4h组星形胶质细胞增殖标记物GFAP、Vimentin的转录水平以及星形胶质细胞炎症相关分子TNF-α、IL-1β、IL-6和Arg-1的转录水平。用免疫荧光法测定wt对照组、wtOGD4h组、apoE-/-对照组、apoE-/-OGD4h组星形胶质细胞Vimentin蛋白的表达。用蛋白印迹法测定wt对照组、wtOGD4h组、apoE-/-对照组、apoE-/-OGD4h组星形胶质细胞GFAP、Vimentin和Arg-1的蛋白表达水平，以确定星形胶质细胞OGD后的状态变化以及apoE在OGD过程中对星形胶质细胞的作用。以P＜0.05认为差异有统计学意义。 结果：1、星形胶质细胞纯度达96%以上，符合后续实验要求。 2、星形胶质细胞OGD2h、4h、6h，细胞活力下降，且apoE-/-星形胶质细胞比wt星形胶质细胞活力下降更明显（P2h=0.004、P4h=0.009、P6h=0.033），OGD6h后，星形胶质细胞活力逐渐升高，wt星形胶质细胞在OGD8h时细胞活力恢复到对照组水平，而apoE-/-星形胶质细胞在OGD10h时细胞活力才恢复到对照组水平。OGD4h时，wt星形胶质细胞活力约65%，apoE-/-星形胶质细胞活力约为35%，对OGD后细胞活力的受损情况反映较佳。 3、星形胶质细胞OGD后，apoE-/-组和wt组细胞凋亡率均升高(PapoE-/-＜0.000和Pwt=0.007)，apoE-/-组比wt组的凋亡更加明显（P=0.003）。 4、与wt组相比，wtOGD4h组GFAP、Vimentin的mRNA和蛋白表达水平升高（PGFAPmRNA=0.046，PGFAP蛋白=0.000，PVimentinmRNA=0.01，PVimentin蛋白＜0.000）；与apoE-/-组相比，apoE-/-OGD4h组GFAP、Vimentin的mRNA和蛋白表达水平无明显差异（PGFAPmRNA=0.608，PGFAP蛋白=0.982，PVimentinmRNA=0.299，PVimentin蛋白=0.281）；与wtOGD4h组相比，apoE-/-OGD4h组GFAP的mRNA和蛋白表达水平低（PGFAPmRNA＜0.000,PGFAP蛋白=0.007），apoE-/-OGD4h组Vimentin的mRNA表达水平无明显差异（PVimentinmRNA=0.088），蛋白表达水平低（PVimentin蛋白=0.040）。 5、在星形胶质细胞OGD4h后，wtOGD4h组和apoE-/-OGD4h组TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平均升高（PwtTNF-α=0.025，PwtIL-1β=0.001和PapoE-/-TNF-α＜0.000，PapoE-/-IL-1β＜0.000），wtOGD4h组IL-6的mRNA表达水平下降（P=0.041），apoE-/-OGD4h组IL-6的mRNA表达水平升高（P=0.034），wtOGD4h组和apoE-/-OGD4h组Arg-1的mRNA和蛋白表达水平均下降（PwtmRNA=0.019，Pwt蛋白=0.001，PapoE-/-mRNA=0.016，PapoE-/-蛋白=0.001），wtOGD4h组Notch1的mRNA表达水平升高（P=0.001），apoE-/-OGD4h组Notch1的mRNA表达水平升高不明显（P=0.265）；与wtOGD4h组相比，apoE-/-OGD4h组TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平高（PTNF-α=0.017，PIL-1β=0.001,PIL-6=0.01），Arg-1的mRNA和蛋白表达水平无明显差异（PArg-1mRNA=0.723，PArg-1蛋白=0.924），Notch1的mRNA表达水平下降（P=0.007）。 结论：apoE的缺失，导致星形胶质细胞在OGD的情况下表现出更低的细胞活力，细胞增殖减慢，细胞凋亡增多，同时呈现出更强的炎症状态。apoE对星形胶质细胞的影响可能通过调控Notch1的表达来实现的。这些发现从新的角度阐明了apoE在缺血缺氧环境中的作用，为治疗缺血性脑卒中提供了新的理论基础。
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