摘要
背景：支气管扩张症（简称支扩，以下内容仅针对非囊性纤维化支气管扩张）是一种以支气管不可逆性扩张为特征的炎症性肺疾病。支扩急性加重频率增高与患者的预后密切相关[1,2]。目前关于支扩的评分系统着重点在病情严重度（见附录）[3,4]。而关于预测支扩出现急性加重相关的评价系统，目前报道较少。铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)与支扩患者肺功能加速恶化、生活质量下降等关系密切[5,6]。目前临床常规使用的培养方法至少需48h出结果，其时效性和程序的复杂性均无法满足临床快速诊断的需求[7]。因此，利用多交叉置换扩增（MultipleCrossDisplacementAmplification，MCDA）技术建立一种快速检测PA的方法有利于优化支扩的诊断、治疗和管理。 目的：探索支扩患者出院1年内再次发生急性加重风险因素，以期通过风险因素识别及建立的可视化-MCDA快速特异检测PA技术指导早期干预措施，减少急性加重次数，优化支扩诊疗及管理，改善患者预后。 方法：1.纳入十堰市太和医院2020年9月至2022年1月期间符合本研究要求的234例支扩住院患者。通过查阅文献，确定需纳入的病历资料。依据患者出院后1年内是否发生急性加重分为两组：急性加重组（A组）和未急性加重组（B组），A组患者108例，B组患者126例。运用统计学方法，从收集的指标中筛选出不同分组中存在统计学差异（P＜0.05）的指标，进行多因素Logistic回归分析，探讨影响支扩1年内发生急性加重的风险因素，用ROC曲线评估Logistic回归模型的预测效果。 2.以PA的ecfX基因为模板，设计MCDA的引物，利用反应体系的颜色变化及琼脂糖凝胶电泳的差异，检测支扩患者痰及肺泡灌洗液（BronchoalveolarLavageFluid，BALF）中的PA。通过检测不同浓度的PA菌株分析可视化-MCDA技术的检测下限；通过检测不同菌株评估特异度。 结果：1.（1）本次纳入研究的234例患者中男性114例（48.7%），女性120例（51.3%），中位年龄60岁；超过半数支扩患者病因不明，共125例，占比53.4%，有109例（46.6%）患者既往有明确感染史，以结核感染最为常见（83例，35.5%）。 （2）两组指标对比分析：①两组体质指数（BodyMassIndex，BMI）及性别组成比例无明显差异（P＞0.05）；②A组的平均年龄、BMI＜18.5kg/㎡患者比例均高于B组（P＜0.05）；③234名患者中，共60例（25.6%）患者痰/BALF培养阳性。阳性结果中，PA占比最高（63.3%）。A组中检出PA患者比例（25.9%）显著高于B组（7.9%）（P＜0.05）。④A组中性粒细胞（N）、C反应蛋白（CRP）、粒淋比（NLR）、血清纤维蛋白原（FIB）、D-二聚体（D-Dimer）水平均高于B组（P＜0.05）。白细胞计数（WBC）、血小板（PLT）、血小板/淋巴细胞（PLR）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）、红细胞沉降率（ESR）、预后营养指数（PNI）在两组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。⑤胸部高分辨率CT（HighResolutionCT，HRCT）：支扩累及范围方面，以双肺受累为主（171例）；累及肺叶情况，主要是左下叶（137例）、右下叶（113例）及右中叶（103例）受累；Reid分型：囊状性101例，柱状型85例，囊柱状型48例；A组患者累及肺叶≥3叶比例明显高于B组（P＜0.05）。⑥肺功能：支扩患者大多数表现为阻塞性通气功能障碍（160例，68.4%）；A组患者FEV1%pred平均水平(53.66±6.96)%显著低于B组患者(64.67±8.39)%（P＜0.05）。（3）将上述有统计学差异的指标：年龄、BMI＜18.5kg/㎡、N、NLR、FIB、D-Dimer、CRP、痰/BALF检出PA、累及肺叶数≥3、FEV1%pred纳入二元Logistic回归中进行分析。结果显示：年龄大，痰/BALF检出PA、累计肺叶数≥3、BMI＜18.5kg/㎡、血清CRP高、NLR高、FEV1%pred低是支扩患者1年内出现急性加重的危险因素。对该模型进行ROC曲线分析：建立的模预测支扩患者出院1年内出现急性加重的AUC为0.948，以灵敏度及特异度之和最大的点作为cut-off点，对应的敏感度是86.1%，特异度是92.9%。 2.建立可视化-MCDA技术用于快速检测PA：（1）染料颜色变化以及琼脂糖凝胶电泳的结果显示，只有PA的ecfX基因在MCDA方法下发生了扩增反应，对照菌株没有发生扩增，说明该方法的特异性好。（2）运用染料法及琼脂糖凝胶法检测MCDA扩增结果，两组均可以成功地检测总DNA浓度为300fg/μl的PA。（3）用于检测126名支扩患者BALF样本，细菌分离培养法和可视化-MCDA方法均检测到32份阳性样品，94份阴性样品。可视化-MCDA技术与临床分离培养方法检测结果一致。 结论：1.（1）支扩患病人群中以中老年女性患者多见，主要为特发性支扩，其次是下呼吸道感染后出现支扩，以肺结核感染为主。（2）支扩累及肺部常呈弥漫性改变，主要累及左下叶及右中下叶。支扩患者大多数表现为阻塞性通气功能障碍。支扩患者下呼吸道感染病原菌最常见的为PA。 2.多因素Logistic回归提示：年龄大，痰/BALF检出PA、累计肺叶数≥3、BMI＜18.5kg/㎡、血清CRP高、NLR高、FEV1%pred低是支扩患者出院1年内再次出现急性加重的风险因素。 3.利用可视化-MCDA技术建立的PA快速检测方法具有快速、稳定、灵敏、特异及性价比高的特点，适用于PA快速检测，有助于优化支扩的诊断、治疗和管理。
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