摘要
目的：观察川崎病（KD）患者血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老的影响，并且在体外水平探讨芦丁对KD患者血清所诱导的人脐静脉内皮细胞衰老的治疗作用。 方法：依照美国心脏病学会（AHA）2017年制定的川崎病诊疗指南的诊断标准，采集2021年3月至2022年3月期间，由十堰市太和医院儿童医疗中心儿科二病区收治的、在接受静脉注射丙种球蛋白（IVIG）和/或激素冲击治疗前留取的23例KD患儿，以及20例同期同年龄段健康体检儿童的外周血清。本研究以分别加入了KD患儿外周血清（KD组）、健康儿童外周血清（HC组）培养的HUVECs为研究对象，采用CCK-8法检测HUVECs增殖情况、细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老情况、RT-qPCR检测HUVECs中P21、P16ink4amRNA转录水平、免疫荧光染色法检测HUVECs中P21、P16ink4a蛋白表达水平，最后对比KD组和HC组HUVECs在经过芦丁(Rutin)或二甲基亚砜（DMSO）处理后衰老相关分泌表型（SASP）的变化情况。 结果：（1）与HC组相比，KD组HUVECs细胞增殖与活力显著降低，P＜0.01； （2）与HC组相比，KD组HUVECsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞占比明显升高，P＜0.001； （3）HUVECs经KD血清分别处理24、48和72小时后，P21和P16ink4amRNA水平显著升高，P＜0.05； （4）HUVECs经KD血清处理24小时后，P21和P16ink4a蛋白水平升高。 （5）与HC+DMSO组相比，KD+DMSO组HUVECsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞占比明显升高，P＜0.001；与KD+DMSO组相比，KD+Rutin组HUVECsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞占比显著降低，P＜0.0001。 （6）与HC+DMSO组相比，KD+DMSO组HUVECs的SASP标记物水平（IL-1β,TNF-α、MCP-1、P21和P16ink4amRNA）显著升高，P＜0.01；与KD+DMSO组相比，KD+Rutin组HUVECs的SASP标记物水平（TNF-α、IL-1β、MCP-1、P21和P16ink4amRNA）显著降低，P＜0.05。 结论：（1）KD患者血清抑制HUVECs增殖与活力、诱导HUVECs衰老，并且促进HUVECs中SASP水平上调。 （2）芦丁不仅可以逆转KD患者血清的促HUVECs衰老效应，还能抑制KD患者血清促HUVECs中SASP水平上调的作用。 目的：观察川崎病（KD）患者血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老的影响，并且在体外水平探讨芦丁对KD患者血清所诱导的人脐静脉内皮细胞衰老的治疗作用。 方法：依照美国心脏病学会（AHA）2017年制定的川崎病诊疗指南的诊断标准，采集2021年3月至2022年3月期间，由十堰市太和医院儿童医疗中心儿科二病区收治的、在接受静脉注射丙种球蛋白（IVIG）和/或激素冲击治疗前留取的23例KD患儿，以及20例同期同年龄段健康体检儿童的外周血清。本研究以分别加入了KD患儿外周血清（KD组）、健康儿童外周血清（HC组）培养的HUVECs为研究对象，采用CCK-8法检测HUVECs增殖情况、细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老情况、RT-qPCR检测HUVECs中P21、P16ink4amRNA转录水平、免疫荧光染色法检测HUVECs中P21、P16ink4a蛋白表达水平，最后对比KD组和HC组HUVECs在经过芦丁(Rutin)或二甲基亚砜（DMSO）处理后衰老相关分泌表型（SASP）的变化情况。 结果：（1）与HC组相比，KD组HUVECs细胞增殖与活力显著降低，P＜0.01； （2）与HC组相比，KD组HUVECsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞占比明显升高，P＜0.001； （3）HUVECs经KD血清分别处理24、48和72小时后，P21和P16ink4amRNA水平显著升高，P＜0.05； （4）HUVECs经KD血清处理24小时后，P21和P16ink4a蛋白水平升高。 （5）与HC+DMSO组相比，KD+DMSO组HUVECsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞占比明显升高，P＜0.001；与KD+DMSO组相比，KD+Rutin组HUVECsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞占比显著降低，P＜0.0001。 （6）与HC+DMSO组相比，KD+DMSO组HUVECs的SASP标记物水平（IL-1β,TNF-α、MCP-1、P21和P16ink4amRNA）显著升高，P＜0.01；与KD+DMSO组相比，KD+Rutin组HUVECs的SASP标记物水平（TNF-α、IL-1β、MCP-1、P21和P16ink4amRNA）显著降低，P＜0.05。 结论：（1）KD患者血清抑制HUVECs增殖与活力、诱导HUVECs衰老，并且促进HUVECs中SASP水平上调。 （2）芦丁不仅可以逆转KD患者血清的促HUVECs衰老效应，还能抑制KD患者血清促HUVECs中SASP水平上调的作用。
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