摘要
目的： 牙周炎是由菌群失调引发的慢性炎症，是目前导致牙齿缺失的主要原因之一。其临床主要表现为牙龈炎症和牙槽骨的吸收。牙周炎的发生发展过程是由多种炎症因子进行调控的，NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-likereceptorthermalproteindomainassociatedprotein3,NLRP3）炎症小体是存在于胞质的多蛋白复合体。它参与了机体的固有免疫反应，活化白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和白细胞介素-18（Interleukin-18,IL-18）等促炎因子并介导细胞焦亡，在维持免疫平衡与调控炎症进程等方面具有重要作用。但在牙周炎中，NLRP3炎症小体激活的具体机制尚不清晰。本实验中分别抑制Caspase-11和Pannexin1的表达，检测其下游NLRP3炎症小体激活情况，探讨Caspase-11在牙周炎中激活NLRP3炎症小体的机制。 方法： 1、使用牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis）-脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）预处理Raw264.7，采用Westernblot方法，检测Caspase-11、Pannexin1、NLRP3、Caspase-1和IL-1β的蛋白表达。 2、应用si-Casp-11转染方法，敲低Raw264.7中Caspase-11的表达，采用Westernblot方法，检测Caspase-11蛋白表达，评价转染效率。使用P.gingivalis-LPS预处理Raw264.7，采用Westernblot方法，检测Caspase-11、Pannexin1、NLRP3、Caspase-1和IL-1β的蛋白表达。 3、应用si-Panx1转染方法，敲低Raw264.7中Pannexin1的表达，采用Westernblot方法，检测Pannexin1蛋白表达，评价转染效率。使用P.gingivalis-LPS预处理Raw264.7，采用Westernblot方法，检测Caspase-11、Pannexin1、NLRP3、Caspase-1和IL-1β的蛋白表达。 4、应用CBX和AZD9056分别抑制Pannexin1通道和P2X7受体的功能，使用P.gingivalis-LPS预处理Raw264.7，采用Westernblot方法，检测Caspase-1和IL-1β的蛋白表达。 5、应用正畸丝结扎法构建大鼠牙周炎模型，使用Micro-CT扫描动物样本，检测牙槽骨吸收情况，并对骨参数进行分析。应用局部注射CBX或AZD9056的方式治疗实验组大鼠，采用Westernblot和组织学染色方法，检测大鼠牙龈组织中Caspase-1和IL-1β的蛋白表达。 结果： 1、WesternBlot结果显示，LPS组Caspase-11、Pannexin1、NLRP3、Caspase-1和IL-1β的蛋白表达较对照组均显著上调。 2、WesternBlot结果显示，si-Casp-11组Caspase-11的蛋白表达较阴性对照组下降了约60%，P.gingivalis-LPS诱导的Pannexin1通道开放和NLRP3炎症小体的激活受到明显抑制。 3、WesternBlot结果显示，si-Panx1组Pannexin1的蛋白表达较阴性对照组下降了约60%，P.gingivalis-LPS诱导的NLRP3炎症小体的激活受到明显抑制。 4、WesternBlot结果显示，CBX组和AZD9056组P.gingivalis-LPS诱导的NLRP3炎症小体的激活受到明显抑制。 5、Micro-CT分析显示，大鼠上颌第一磨牙存在较为严重的骨吸收现象，釉牙骨质界到牙槽嵴顶（Cementoenameljunctiontothealveolarbonecrest,CEJ-ABC）的距离是对照组的3.0倍。Westernblot和组织学染色结果显示，两抑制剂组大鼠牙龈组织中Caspase-1和IL-1β的表达较牙周炎组降低。 结论： 1、Caspase-11通过开放Pannexin1通道促进牙周炎中NLRP3炎症小体激活； 2、Pannexin1通道通过释放胞外ATP介导牙周炎中NLRP3炎症小体激活。
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