摘要
目的:从分子生物学角度分别探讨麝香保心丸（SBP）和达格列净（DAPA）对慢性心衰心肌炎症损伤、心肌纤维化的影响及其作用机制;探讨麝香保心丸与达格列净联用对心衰大鼠心肌的保护作用。 方法:1、建立心衰大鼠模型:将60只健康Wistar雄性大鼠随机分为心衰组（n=48）及正常对照组（n=12）,给予心衰组大鼠腹腔注射阿霉素建立慢性心衰大鼠模型，每日一次，共六周，6周后给予心脏彩超检查，造模大鼠的射血分数（EF）值小于60％提示造模成功。2、分组给药:大鼠造模成功后将其随机分为4组:模型对照组（n=12）,达格列净组（n=12）,达格列净+麝香保心丸组（n=12）,麝香保心丸组（n=12）,各组均于末次阿霉素腹腔注射后7天各治疗组按照各计算好的药物剂量进行灌胃，空白对照组和模型对照组的大鼠分别给予等体积蒸馏水灌胃。3、观测指标:药物干预28天后处死大鼠取心脏制备标本，一部分用于心肌组织切片行病理染色，另一部分用于分子生物学检测。HE染色法用来观察心肌组织病理学改变，Masson染色法观察心肌组织心肌纤维化情况蓝色部分表示心肌胶原纤维沉积部分，以胶原容积分数记录并评估胶原沉积情况，Tunel染色法评估心肌细胞凋亡情况并记录细胞凋亡率，免疫组化法分别检测心肌组织胶原Ⅰ和Ⅲ的沉积情况、Westernblot法检测心肌纤维化TGF-β1信号通路相关指标TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。 结果:（1）HE染色:模型对照组相较于空白对照组呈现出排列紊乱的心肌纤维，炎性细胞浸润较严重，与模型对照组相比，SBP组、DAPA组和SBP+DAPA组炎性细胞浸润程度明显降低。Masson染色:模型对照组相较于空白对照组蓝色部分即心肌纤维化区域较多，胶原容积分数较高（P＜0.05）,与模型对照组相比，SBP组、DAPA组和SBP+DAPA组心肌纤维化区域明显减少，胶原容积分数明显降低（P＜0.05）。Tunel染色:模型对照组相较于空白对照组细胞凋亡数较多，细胞凋亡率偏高（P＜0.05）,与模型对照组相比，SBP组、DAPA组和SBP+DAPA组的细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）。免疫组化法:模型对照组相较于空白对照组胶原Ⅰ和胶原Ⅲ显著增高（P＜0.05）,与模型对照组相比，SBP组、DAPA组和SBP+DAPA组的心肌组织胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的沉积明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。 （2）Westernblot法检测相关指标蛋白:与空白对照组相比模型对照组心肌TGF-β1蛋白表达明显升高、Smad7表达明显下降(P＜0.05）,Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平没有明显改变（P＞0.05）。心衰模型大鼠经SBP和DAPA治疗后TGF-β1蛋白表达明显下降（P＜0.05）,Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3和Smad7表达明显上升，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论:1.SBP和DAPA可以减轻阿霉素诱导的心衰大鼠心肌炎症损伤且两药的联合治疗效果明显优于SBP单独治疗。2.SBP和DAPA能够改善心衰大鼠心肌纤维化及胶原沉积并且两药联用相较于单独运用SBP减少胶原Ⅲ效果更明显。3.SBP和DAPA通过调控TGF-β1/Smads信号通达到抗心衰大鼠心肌纤维化的作用且两药联合效果优于单一用药。
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