摘要
研究背景 子痫前期（preeclampsia，PE）是一种仅在孕产妇出现的特殊病症，全球约2%～8%的孕产妇受到其影响，是造成孕产妇和围产儿死亡率升高的重要原因之一。目前普遍公认其病理基础是滋养细胞浸润能力受损以及胎盘螺旋动脉重铸不足。当胎盘的抗氧化系统无法有效清除过多的氧化应激时，滋养细胞浸润能力受到影响，导致浸润过浅，使得子宫螺旋动脉的重塑能力不足以及胎盘的浅着床，从而造成胎盘缺血缺氧，进而使氧化应激水平进一步升高，最终引起孕产妇体内出现一系列的氧化应激损伤。经典Wnt/β-catenin信号通路在滋养细胞侵袭浸润，胚胎生长发育和细胞功能的维持等方面具有重要作用。丹参素是一种从丹参中提取的已知化合物，其多种药理作用已被证实，如抗氧化物、抗血栓、抗纤维化、抗菌消炎等。研究表明，经典Wnt/β-catenin信号通路参与了PE的发生，丹参素可有效改善PE小鼠模型的预后，因此，认为丹参素可能是通过抑制氧化应激调控Wnt/β-catenin信号通路，从而为丹参素治疗PE提供一种新的理论基础。 研究目的 以HTR-8/SVneo细胞为研究对象，探讨经典Wnt/β-catenin信号通路在氧化应激损伤滋养细胞中的作用，研究丹参素对滋养细胞氧化应激损伤改善的机制，为丹参素治疗子痫前期患者奠定理论基础。 研究方法 1、细胞生长至覆盖培养皿的80%面积时，进行接种传代培养。进行氧化应激模型制作：缺氧8小时，复氧16小时。共两个循环，48小时。设置不同浓度的丹参素处理组（0.01、0.1、1、10、100μmol/L）缺氧/复氧滋养细胞24或48小时，利用CCK8对滋养细胞活力检测，选择最适丹参素浓度及最适处理时间作为后续实验条件； 2、我们将实验分为4组：正常对照组、正常培养+丹参素处理组、缺氧/复氧处理组、缺氧/复氧+丹参素处理组。通过荧光显微镜检测比较各处理组和对照组活性氧（ROS）的水平差异； 3、通过RT-qPCR技术检测各处理组及对照组Wnt/β-catenin信号通路中DKK1、GSK-3β、CTNNB1（β-catenin蛋白mRNA）的转录水平； 4、通过Westernblot技术检测各处理组及对照组Wnt/β-catenin信号通路中DKK1、Wnt1、GSK-3β、β-catenin的蛋白表达水平。 研究结果 1、CCK8检测提示丹参素最适浓度为10μmol/L，作用48小时后细胞活力明显恢复； 2、荧光显微镜检测显示，缺氧/复氧处理可导致HTR-8/SVeno细胞内的活性氧产生明显增加。然而，使用丹参素处理可以显著改善这种情况。此外，丹参素处理对正常培养的HTR-8/SVneo细胞内的活性氧水平没有影响； 3、RT-qPCR检测结果显示，缺氧/复氧处理组中的DKK1转录水平较正常对照组明显升高（P=0.0137）；缺氧/复氧处理组中的GSK-3β转录水平较正常对照组明显下降（P=0.0125）；缺氧/复氧处理组中的CTNNB1转录水平较正常对照组、正常培养+丹参素处理组以及缺氧/复氧+丹参素处理组中均明显下降（P＜0.0001、P=0.0001、P=0.0029），缺氧/复氧+丹参素处理组中的CTNNB1转录水平较正常对照组存在一定程度下降（P=0.0145）。 4、Western-Blot检测结果显示，缺氧/复氧处理组中的DKK1表达水平较正常对照组明显升高（P=0.0480）；缺氧/复氧处理组中的GSK-3β表达水平较正常对照组、正常培养+丹参素处理组明显下降（P=0.0090、P=0.0407），缺氧/复氧处理组中的β-catenin表达水平较正常对照组、正常培养+丹参素处理组以及缺氧/复氧+丹参素处理组中均明显下降（P=0.0003、P=0.0034、P=0.0062）；缺氧/复氧处理组中的Wnt1表达水平较正常对照组和缺氧/复氧+丹参素处理组中均明显下降（P=0.0436、P=0.0219）。 研究结论 1、氧化应激主要通过抑制Wnt1蛋白及β-catenin蛋白的表达，阻断Wnt/β-catenin信号通路，损伤滋养细胞，加速滋养细胞凋亡，使得滋养细胞侵袭力降低。 2、丹参素可以显著改善滋养细胞的氧化应激，促进Wnt1和β-catenin蛋白水平恢复，并且可以恢复Wnt/β-catenin信号通路，从而有效地保护滋养细胞免受氧化应激损伤，为丹参素治疗PE提供了一种全新的理论基础。
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