摘要
背景： 肺腺癌作为最常见的恶性肿瘤之一，易发生血行转移，多数患者确诊即为晚期。新兴治疗方式的出现虽然提高了一部分患者的生存率，但多数肺腺癌患者的预后仍不容乐观。随着基础研究的深入，人们发现细胞色素c（cytochromec,Cytc）在细胞中具有重要作用，并提示其与肿瘤的发生发展及治疗耐药密切相关，Cytc可能是影响肺腺癌进展的重要靶点。然而，Cytc在肺腺癌中发挥作用的机制尚不明确，其在肺腺癌中的表达及与患者预后的关系亦鲜有研究。 方法： 1.从TCGA（TheCancerGenomeAtlas）数据库中LUAD（LungAdenocarcinoma）项目获取肺腺癌患者的RNAseq数据和临床信息，比较癌旁组织和肿瘤组织中CYCS基因mRNA的表达水平。在HPA（HumanProteinAtlas）数据库中检索免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色切片，以展示CYCS编码的蛋白在正常肺组织和肺腺癌组织中的表达水平。 2.在TCGA-LUAD项目中以CYCS表达量的中位数为分界值，将全部肿瘤样本分成高表达组和低表达组。Cox回归分析两组样本总生存期（overallsurvival,OS）、疾病特异性生存期（diseasespecificsurvival,DSS）和无进展间隔（progressfreeinterval,PFI）分布的差异，随后进行亚组分析并绘制Kaplan-Meier曲线。 3.采用单、多因素Cox分析以检验CYCS作为独立预后因素的有效性。绘制列线图预测肺腺癌患者1年、3年和5年生存概率情况。从GEO（GeneExpressionOmnibus）数据库中获取GSE31210、GSE50081、GSE68465和GSE72094数据集的数据，采用Cox回归分析所获得的风险比（hazardratio,HR）值及P值，用于meta分析进行验证。 4.利用GSEA（4.2.3）软件对CYCS高、低表达组中的基因富集分析，“estimate”包和“GSVA”包被用于免疫浸润分析以评估高、低表达组中肿瘤的纯度和浸润免疫细胞的差异。 5.纳入吉林大学第一医院胸外一科收治的浸润性肺腺癌患者作为研究对象。获取病理切片进行IHC染色量化CYCS表达程度，并将所有临床样本分为高、低表达两组，Cox分析比较两组患者OS的差异。 结果： 1.TCGA-LUAD项目中包括535个肺腺癌样本和59个癌旁正常肺组织样本，Tumor组CYCS表达水平高于Normal组，其中57对配对样本中也表现出同样的差异。IHC染色图片显示：在肺腺癌肿瘤组织中CYCS呈高强度染色，数量gt;75%，定位集中在细胞质和膜状结构上。 2.CYCS高、低表达组OS的中位生存时间分别为42.9个月和59.9个月。CYCS高表达组的OS、DSS和PFI均低于低表达组。亚组分析的结果显示：女性患者中高表达组预后较差（P=0.007），而男性患者中两组间无明显差异（P=0.132）。两个不同年龄亚组中高表达组预后均较差（P＜0.05）。Ⅱ~Ⅳ期患者CYCS高表达组预后显著较差，（P＜0.001），而Ⅰ期患者高、低表达组预后无显著差别（P=0.615）。 3.单因素Cox分析显示：CYCS的表达情况与OS之间存在明显关联（P＜0.01）。在控制了其他混杂变量后，CYCS的表达情况（高表达组HR=1.51，P＜0.01vs.低表达组）仍然可视为肺腺癌患者OS的预后指标。选用固定效应模型行meta分析，总效应HR=1.44。 4.GSEA分析结果表明：CYCS涉及特定功能及通路，这些信号通路的扰动可能影响肺腺癌患者的预后。ESTIMATE分析结果显示：基质评分、免疫评分和ESTIMATE评分在CYCS高表达组中较低（P＜0.001）。高表达组中CD8+T细胞、B细胞、巨噬细胞和DC细胞等免疫细胞含量显著低于低表达组，而Tgd细胞、Th2细胞含量显著高于低表达组。 5.共纳入来自吉林大学第一医院的85例研究对象，CYCS低表达组中有42例患者，高表达组中有43例患者。其中，高表达组患者OS显著较差，HR=2.22，P=0.020vs.低表达组。 结论： 1.CYCS在肺腺癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织。 2.CYCS在肺腺癌组织中的表达水平与患者的预后相关，CYCS高表达的患者预后较差，OS、DSS、PFI和中位生存时间较短。 3.CYCS的表达水平可以作为肺腺癌患者的独立预后因素。 4.CYCS的表达与肺腺癌肿瘤微环境中的免疫细胞之间具有一定相关性。 5.Cytc在肺腺癌的发生发展中起到一定作用，有望成为肺腺癌治疗的潜在靶点。
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