摘要
蜂王浆（Royal Jelly，RJ），是工蜂（Apis mellifera）下咽和下颌腺产生的黄白色的酸性分泌物，略带苦味和强烈的刺激性气味，其成分复杂，具有多种生物学功能，并广泛用于医疗、保健、化妆品和其他行业。作为蜂王浆中特有的脂肪酸，10-羟基-2-癸烯酸（10-HDA）也具有多种生物学功能。目前，关于RJ和10-HDA对血管内皮细胞的生物学作用和作用机制的研究还未见有报道。本研究体外建立H2O2致人脐静脉内皮细胞（HUVEC）衰老模型，在细胞水平上探讨RJ和10-HDA对其的抗衰老作用，并进一步测定部分酶活性，以及部分细胞内和细胞间信号分子的变化，试图在分子水平上探讨10-HDA可能的抗衰老机制。希望通过此研究，为探明RJ生物学活性的物质基础，以及更好地利用RJ和10-HDA提供实验依据；为开发针对心血管疾病的保健品和药物奠定一定的理论基础。 1.RJ对HUVEC细胞抗衰老作用 本实验采用CCK-8法，探究了不同浓度的H2O2对HUVEC细胞的抑制作用。比较了九个浓度（0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5mmol/L）的H2O2对HUVEC细胞的抑制作用，发现当H2O2浓度为2.5mmol/L时，细胞增殖活力是51%，抑制作用较强，故H2O2组选用此浓度作为衰老模型浓度。接着探究了白藜芦醇（Res）作为阳性对照的最适浓度，比较了2、4、6、8μmol/L的白藜芦醇对细胞增殖活力的影响。根据实验结果，将阳性对照的浓度定为8μmol/L的白藜芦醇。通过添加RJ（25、50、100μg/mL）预处理细胞24h，再用确定浓度的H2O2处理细胞2h。RJ对模型细胞增殖的影响通过CCK-8法进行测定；RJ对模型细胞衰老的影响通过SA-β-Gal染色法进行测定；RJ对模型细胞周期的影响通过流式细胞术进行分析。结果表明，RJ可以促进模型细胞的增殖，降低细胞染色阳性率，并且能改善模型细胞G1期停滞的状态，从而达到延缓衰老的作用。 2.10-HDA对HUVEC细胞抗衰老作用及其机制的研究 本研究利用前期确定的细胞衰老模型，通过添加不同浓度的10-HDA（50、100、150μmol/L）进行干预。10-HDA对模型细胞增殖的影响通过CCK-8法进行测定；10-HDA对模型细胞衰老的影响通过SA-β-Gal染色法进行测定；10-HDA对模型细胞周期的影响通过流式细胞术进行分析；10-HDA对细胞内抗氧化酶SOD、CAT活性和MDA含量的影响通过相应试剂盒进行测定；10-HDA对模型细胞分泌IL-6和IL-8含量的影响通过酶联免疫吸附法测定；Nrf2/HO-1通路和p38MAPK通路中Nrf2、HO-1、p38和p-p38蛋白的表达水平通过Western Blot法测定。结果发现，10-HDA可以增强模型细胞活力，降低衰老细胞染色阳性率，改善模型细胞G1期停滞的状况。说明10-HDA是RJ抗HUVEC细胞衰老的有效成分之一。10-HDA可以增强模型细胞中SOD和CAT活力，降低细胞中MDA、IL-6和IL-8含量；促进Nrf2、HO-1蛋白的表达，并降低p38磷酸化水平。这表明10-HDA的抗衰老作用可能与Nrf2/HO-1通路抗氧化和p38MAPK通路抗炎症有关。
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