摘要
背景：结肠癌（Colon Cancer）是目前最常见的恶性肿瘤之一，也是人类恶性肿瘤致死的主要病因之一。美国全球癌症统计报告显示，结肠癌的发病率已高居男性第三、女性第二。因此，致力于研究结肠癌的发生机制以及治疗手段有重要意义。近年来，五氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）作为治疗结肠癌应用最广泛的化疗药物之一，通过抑制恶性肿瘤DNA的合成，发挥抗肿瘤作用。近期因药物的滥用，结肠恶性肿瘤对5-Fu也产生耐药性。大黄素（Emodin）是一种天然活性蒽醌类化合物，从中草药大黄的根茎中所提取，且已被证实对大多数实体肿瘤均有不错的疗效。有相关报道指大黄素能够抑制结肠恶性肿瘤增殖、侵袭、迁移等能力，可作为治疗结肠恶性肿瘤的潜在药物。然而，二者联合作用于结肠癌细胞后，是否产生更强的抗肿瘤作用，是否可以逆转5-Fu的耐药性，目前尚不清楚。 目的：本研究旨在探讨5-Fu单用或联合大黄素处理人结肠癌细胞SW620后，对其增殖、迁移、凋亡等能力的影响，以及进一步研究大黄素是否能逆转结肠癌细胞对5-Fu的耐药性，并探讨二者联合刺激人结肠癌细胞后的作用机制，为治疗结肠恶性肿瘤提供了更加宽广的前景。 方法：将亲本人结肠癌细胞SW620采用逐步加大5-Fu的药物浓度培养耐5-Fu的SW620细胞系（SW620/5-Fu）作为研究对象。加用不同药物浓度的5-Fu和（或）大黄素处理亲本株和耐药株48 h后，通过CCK-8实验检测对结肠癌细胞增殖的影响；通过划痕实验检测对结肠癌细胞迁移能力的影响；通过乳酸脱氢酶实验（Lactic Dehydrogenase，LDH）、Caspase-3活性实验、流式细胞技术检测对结肠癌细胞凋亡能力的影响；进一步通过免疫印迹实验（Western blot,WB）检测对结肠癌表达凋亡相关蛋白的影响。 结果：CCK-8检测对细胞增殖的影响， 5-Fu和大黄素单独作用于人结肠癌SW620细胞48小时后IC50分别是54.37?M和25.56?M ，随后用小于IC50/大黄素和IC50/5-Fu的浓度联用后，抑制细胞增殖的作用较单独用药组更加明显。同时，5-Fu作用于SW620/5-Fu细胞后， 5-Fu处理SW620/5-Fu细胞后IC50明显升高，对SW620/5-Fu细胞的增殖抑制作用明显减弱，但大黄素对SW620/5-Fu的IC50变化较低，且5-Fu与大黄素联用后可以增强5-Fu对SW620/5-Fu细胞的增殖抑制作用，逆转结肠癌细胞对5-Fu的耐药性。划痕实验检测对细胞迁移的影响，与DMSO组相比，大黄素和5-Fu均能抑制人结肠癌细胞的迁移，但5-Fu对耐药细胞株SW620/5-Fu的抑制程度较弱，而大黄素与5-Fu联用后，不仅能增强对SW620细胞迁移的抑制作用，还能逆转SW620/5-Fu细胞对5-Fu的耐药性，抑制迁移。通过LDH实验、Caspase-3活性实验、流式细胞实验检测对细胞凋亡的影响，与DMSO组相比，大黄素和5-Fu均可以诱导人结肠癌SW620细胞和SW620/5-Fu细胞的凋亡，且大黄素与5-Fu联用后诱导细胞凋亡的能力更强，大黄素还能逆转SW620/5-Fu细胞对5-Fu的耐药性。免疫印迹试验检测蛋白表达情况，与DMSO组相比，大黄素和5-Fu处理人结肠癌细胞后，通过抑制Bcl-2和激活裂解的Caspase-3、Caspase-8、Bax诱导细胞凋亡，且联用后蛋白表达量的趋势更加明显。此外，大黄素与5-Fu联用通过上调Fas/Fas L信号通路逆转SW620/5-Fu细胞对5-Fu的耐药性，增强抗肿瘤特性。 结论：体外实验中，大黄素和5-Fu均能不同程度地抑制人结肠癌SW620细胞以及耐药细胞株的增殖和迁移能力、诱导细胞凋亡，且二者联合治疗具有协同作用。尽管5-Fu对SW620/5-Fu细胞的抗肿瘤效果较SW620细胞弱，但大黄素可以通过上调Fas/Fas L通路逆转SW620/5-Fu细胞对5-Fu的耐药性，增强5-Fu的抗肿瘤作用。因此大黄素与5-Fu联合应用可能为治疗耐5-Fu的结直肠恶性肿瘤提供新的思路。
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